新冠肺炎实验室建立文件系列之2-新型冠状病毒核酸检测标准操作程序.docx

**医院检验科 标题：新型冠状病毒核酸检测标准操作程序 文件编号：*** 版本号：1 修改号：0 生效日期：2020-**-** 发行部门：技术管理组 编制人：** 审核人：*** 批准人：*** 页码：第 PAGE 94 页 共 NUMPAGES 94页 第1版第0次修订 2020年**月**日实施 02 新型冠状病毒核酸检测标准操作程序 1 目的 规范PCR方法检测新型冠状病毒核酸的工作程序，保证实验结果的正确可靠。 2 范围 适合于检验科发热门诊。 3 职责 3.1 检验人员负责按照本检测细则对被检样本进行检测； 3.2 复核人员负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核； 3.3 专业组负责人负责对专业组综合管理和检测报告的审核。 4 程序、内容和要求 任何新型冠状病毒的检测都必须在具备适当条件的实验室由经过相关技术安全培训的人员进行操作。本程序中的核酸检测方法主要针对新型冠状病毒基因组中开放读码框1a/b（open reading frame 1ab，ORF1ab）和核壳蛋白（nucleocapsid protein，N）。 在实验室要确认一个病例为阳性，满足以下条件：同一份标本中新型冠状病毒2个靶标（ORF1ab、N）特异性PCR检测结果均为阳性。 阴性结果也不能排除新型冠状病毒感染，需要排除可能产生假阴性的因素，包括：样本质量差，比如口咽等部位的呼吸道样本；样本收集的过早或过晚；没有正确的保存、运输和处理样本；技术本身存在的原因，如病毒变异、PCR抑制等。 4.1 样本采集（推荐鼻/咽拭子） 4.1.1 咽拭子（使用透景样本保存液） 用 2 根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子同时擦拭双侧咽扁桃体及咽后壁，将拭子头浸入样本保存液（也可使用等渗盐溶液、组织培养液或磷酸盐缓冲液）的管中，尾部弃去，旋紧管盖作为样本使用。 4.1.2 鼻拭子（使用透景样本保存液） 将 1 根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子轻轻插入鼻道内鼻腭处，停留片刻后缓慢转动退出。取另一根聚丙烯纤维头的塑料杆拭子以同样的方法采集另一侧鼻孔。上述两根拭子浸入同一样本保存液的采样管中，尾部弃去，旋紧管盖作为样本使用。 4.1.3 鼻咽拭子样本（未使用透景的保存液）： 在有鼻咽拭子的收集管中加入1ml生理盐水，振荡混匀后将全部液体倒入1.5ml灭菌离心管中作为样本使用。 4.2 标本保存 用于病毒分离和核酸检测的标本应尽快进行检测，能在24小时内检测的标本可置于4℃保存；24小时内无法检测的标本则应置于-70℃或以下保存（如无-70℃保存条件，则于-20℃冰箱暂存）。 应设立专库或专柜单独保存标本，标本运送期间应避免反复冻融。 4.3 样本灭活 为了减少感染样本对人和环境的潜在危害，推荐样本检测前进行灭活处理：先56℃干/水浴60 min，静置10 min至室温（避免气溶胶），然后进行处理。 4.4 核酸提取 4.4.1 Smart32核酸提取仪提取程序 4.4.1.1操作前准备 将处理好的样本以及试剂添加在96 孔提取板内。 运行实验程序前，检查96 孔提取板及磁棒套是否正确放置（注意：放置磁棒套时，将磁棒套顺着卡槽推入到尽头）。 4.4.1.2操作 确保仪器的电源线与合规格的电源插座连接好后，打开仪器背面右下的主电源开关。 仪器上电开机后，进行自检。如下图所示： 待完成自检后系统进入主菜单操作界面。如下图所示： 主界面主要包括仪器功能选项及快捷实验运行方式；通过点击所要运行的程序快捷方式的图标及“程序列表”，可进入实验运行界面或实验程序列表界面。如下图所示： 点击 和 按键查看完整程序运行步骤； 点击 按键后，实验程序将开始运行。 注意：执行前请务必确认： 注意：96孔提取板是否正确放置； 注意：磁棒套是否推入到位； 注意：仪器门是否关好。 在程序运行过程中，当前运行步骤，该行信息变为深色；在程序运行过程中，仪器门不能打开。 实验结束后，仪器弹窗实验结束。 在主界面左边框主选项中，点击“开门”选项，当听到“嗒”一声时，手动拉开仪器门。 仪器的清理：卸载仪器上的试剂、耗材、实验产生的废物。 点击进行紫外灯照射消毒。 4.4.1.3 Smart32 核酸提取仪日常维护 指导原则：当Smart32 核酸提取仪在标准的实验室环境下最佳的工作条件工作时，仪器不需要定期的维护，但是，应由经过厂商指导的实验室技术人员进行定期的清洁与自测诊断。 清洁：定期或维修搬运前应断电并清洁仪器的外表面，以防止任何可能干扰仪器功能的灰尘粒子。用微湿