遗传病分析5DNA扩增产物鉴定课件.pptxVIP

遗传病的分析5 DNA扩增产物的鉴定 限制性内切酶酶切技术 琼脂糖凝胶电泳技术 一、限制性内切酶酶切技术 ， 因此可以选择合适的 内切酶切割扩增产物， 理 § 限制性内切酶大多由大肠杆菌中提取纯化 得到，能特异性识别和切割双链DNA分子 中的特异序列 ( 一般识别4－6个核苷酸序 列) § 由于大多数内切酶具绝对的位点特异性 通过片段大小鉴定基因是否有缺失或缺陷。 原 、 器材与试剂 § 高速离心机、恒温水浴箱、移液枪 枪头、塑料离心管等 § Lwe I限制性内切酶、三蒸水、缓冲 液等 作 1 、取样品2份 (病人、正常人PCR扩增产物) 内切酶 0 5ul 、 、 . 0.5u 扩增产物 3 5ul 无菌ddH2O 14ul 缓冲液10× 2ul 2、 37oC 3h 3h (或过夜) C水浴 操 2 置 20ul混匀 37 二、琼脂糖凝胶电泳技术 ， 。 § 一 DNA EB ， ， 。 。 § ， DNA 。 理 § 溴化乙啶 (EB) 是一种高度灵敏的荧光染色剂， 用于观察琼脂糖凝胶中的DNA 结合，在TAE介质溶液中，进行电泳。由于电场 作用