实验大肠杆菌的培养和分离.pptVIP

③将玻璃刮刀放在酒精灯火焰上灼烧，待玻璃刮刀冷却后，在酒精灯旁打开培养皿，将菌液涂布到整个培养基表面。 本文档共40页；当前第31页；编辑于星期二\1点21分 ④将培养皿倒置，在37℃恒温箱中培养24~48 h。 ④恒温培养箱中培养 恒温培养箱 本文档共40页；当前第32页；编辑于星期二\1点21分 结果：以每个培养皿中有20个以内的单菌落最为合适。 10-1 10-2 10-3 10-4 10-5 本文档共40页；当前第33页；编辑于星期二\1点21分 本文档共40页；当前第34页；编辑于星期二\1点21分 倒平板 平板划线分离 练一练，识一识 稀释涂布分离 接种环 玻璃刮刀 本文档共40页；当前第35页；编辑于星期二\1点21分 例题：要获得遗传特性单一的大肠杆菌菌种，一般必须对原有的大肠杆菌菌种进行扩大培养，并利用纯化技术得到单菌落的菌种。请回答下列有关大肠杆菌的培养和分离实验的相关问题： （1）对买回来的大肠杆菌菌种进行扩大培养，一般用LB培养基，在培养基中为微生物提供碳源、氮源和能源的物质主要是　　　　　　　　　　，为调节渗透压，要加入一定量的　　　。为进行大肠杆菌的分离，还要加入 配制成固体培养基，并进行倒平板的操作。 蛋白胨和酵母提取物 氯化钠 琼脂 本文档共40页；当前第36页；编辑于星期二\1点21分 什么是微生物？ 乳酸杆菌 黑曲霉 微生物：结构简单、形体微小的单细胞、多细胞或没有细胞结构的低等生物。 本文档共40页；当前第1页；编辑于星期二\1点21分 什么是培养基？ 三角瓶 培养皿 试管 液体培养基：扩大培养，工业生产。 固体培养基：分离纯化，鉴定菌种，计数，保藏。 凝固剂：琼脂 本文档共40页；当前第2页；编辑于星期二\1点21分 培养基的配制 营养成分 功能和来源 碳源 氮源 生长因子 水 无机盐 提供碳元素：主要是糖类 提供氮元素：蛋白胨、牛肉膏、尿素 维生素、氨基酸和含氮碱基 H2O，良好的溶剂 NaCl：维持一定的渗透压 本文档共40页；当前第3页；编辑于星期二\1点21分 LB 培养基的配制 LB固体培养基：蛋白胨 0.5g，酵母提取物 0.25g，氯化钠 0.5g，加水50 mL，琼脂 1g。调节pH 至7.6。 封口膜 本文档共40页；当前第4页；编辑于星期二\1点21分 菌落：单细菌的克隆 菌落：在固体培养基上，由单个细菌繁殖而来的一个肉眼可见的具有特定形状的子细胞群体。 霉菌 大肠杆菌 本文档共40页；当前第5页；编辑于星期二\1点21分 菌落的作用：鉴定菌种的重要依据 菌落特征：菌落的形状、大小、隆起程度和颜色等。 本文档共40页；当前第6页；编辑于星期二\1点21分 大肠杆菌 大肠杆菌：革兰氏阴性、兼性厌氧的肠道杆菌。 本文档共40页；当前第7页；编辑于星期二\1点21分 怎样无菌操作？ 高压蒸汽灭菌：培养皿、试管、三角瓶、枪头、玻璃三角刮刀、接种环、镊子。在121℃下灭菌15 min。 高压蒸汽灭菌锅 本文档共40页；当前第8页；编辑于星期二\1点21分 培养皿 三角瓶 玻璃三角刮刀 接种环 微量移液器 枪头 本文档共40页；当前第9页；编辑于星期二\1点21分 棉花塞、封口膜、牛皮纸或旧报纸、橡皮筋 不能用脱脂棉：易吸水，容易引起污染。 本文档共40页；当前第10页；编辑于星期二\1点21分 酒精灯和酒精棉球 灭菌：杀死所有微生物。 消毒：杀死部分微生物（不包括芽孢和孢子）。 本文档共40页；当前第11页；编辑于星期二\1点21分 超净工作台 ①打开紫外灯和过滤风，灭菌30 min。 ②点燃酒精灯→酒精棉擦拭桌面→酒精棉球擦手。 酒精灯火焰附近旁进行 灼烧灭菌 防止杂菌污染 本文档共40页；当前第12页；编辑于星期二\1点21分 用细菌过滤器除菌：尿素加热会分解，用G6玻璃砂漏斗过滤。 本文档共40页；当前第13页；编辑于星期二\1点21分 什么是倒平板？ 将灭菌后的固体培养基倒入已灭菌的培养皿中，冷却凝固后制成的培养基。 本文档共40页；当前第14页；编辑于星期二\1点21分 Step1：培养基的配制和灭菌 ①将50 mL LB液体培养基、50 mL LB固体培养基和培养皿进行高压蒸汽灭菌。 无菌水 培养皿用牛皮纸包扎 本文档共40页；当前第15页；编辑于星期二\1点21分 Step2：倒平板 ②在酒精灯火焰旁将三角瓶中的固体培养基（冷却到60℃）倒入灭菌的培养皿中，置于水平放置上，并轻轻晃动，待凝固后形成平面。 超净台 本文档共40页；当前第16页；编辑于星期二\1点21分 Step3：接种后扩大培养 ③将斜面上培养的大肠杆菌菌种接种到灭菌后的液体培养基中，使其