犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及DNA疫苗的构建的中期报告.docxVIP

犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立及DNA疫苗的构建的中期报告 本次中期报告共分为两部分：一是犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立，二是DNA疫苗的构建。 一、犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 1. 文献调研 通过查阅相关文献，收集了犬瘟热病毒荧光定量RT-PCR检测方法的研究进展及其相关参数的优化方法。 2. 材料准备 收集犬瘟热病毒阳性血清样品并提取RNA，借助微量分光光度计检测RNA的浓度和质量，制备RNA模板。 3. RT-PCR反应条件优化 在此基础上，通过反复实验确定合适的荧光定量RT-PCR反应条件，包括逆转录反应、PCR扩增反应和荧光定量检测。 4. 稀释曲线及靶基因浓度曲线实验 根据反应条件优化后，制备稀释系列标准曲线。通过荧光定量RT-PCR反应，获取犬瘟热病毒阳性样本的稀释曲线和靶基因浓度曲线。 5. 检测犬瘟热病毒阳性血清 运用上述方法，对犬瘟热病毒阳性血清进行检测，结果显示该方法具有高灵敏度和特异性。 二、DNA疫苗的构建 1. 文献调研 在文献调研中，收集了犬瘟热DNA疫苗的构建方法及其相关基因的选择。 2. 编制基因序列并进行片段合成 根据相关文献及Genbank数据库中的犬瘟热病毒基因序列，设计引物并进行片段合成。 3. 质粒构建 将片段依次克隆到质粒载体中，构建了犬瘟热DNA疫苗的质粒。 4. 鉴定质粒质量 利用酶切和测序等技术，鉴定质粒中犬瘟热病毒基因的序列及其正确性。 5. 质粒转染 将质粒用于转染细胞，观察细胞是否表达了对应的蛋白。 目前，荧光定量RT-PCR检测方法已经建立并具有一定的可靠性和稳定性。DNA疫苗的构建仍在进行中，需要借助更多实验手段对其进行验证和优化，以期取得更好的效果。