氨基酸总量的测定.docxVIP

氨基酸总量(氨态氮)的测定 一、目的与原理： 1、了解掌握单指示剂与双指示剂甲醛滴定法测氨基酸总量的方法与原 理： 二、单指示剂甲滴定法: 二、单指示剂甲 滴定法: 原理：氨基酸具有酸、碱两重性质，因为氨基酸含有-COOH基显示 酸性，又含有-NH基显示碱性。由于这二个基的相互作用，使氨基酸成 2 为中性的内盐。当加入甲醛溶液时，-nh2与甲醛结合，其碱性消失，破 坏内盐的存在，就可用碱来滴定-COOH基，以间接方法测定氨基酸的量， 反应式可能以下面三种形式存在。 试剂 40%中性甲醛溶液，以麝香草酚酞为指示剂，用1N NaOH溶液中和。 0.1%麝香草酚酞乙醇溶液。 0.100N氢氧化钠标准溶液。 （三）操作步骤: 称取一定量样品（约含20毫克左右的氨基酸）于烧杯中（如为固体加水 50毫升），加2-3滴指示剂，用0.1OON NaOH溶液滴定至淡蓝色。加入 中性甲醛20毫升，摇匀，静置1分钟，此时蓝色应消失。再用0.1OON NaOH 溶液滴定至淡蓝色。记录两次滴定所消耗的碱液毫升数，用下述公式计 算 计算： 氨基酸态氮（%）二（N VX0.014X100）/W 式中： N： NaOH标准溶液当量浓渡。 V： NaOH标准溶液消耗的总量（m1） W：样品溶液相当样品重量（克）。 0.014 :氮的毫克当量。 三、双指示剂甲醛滴定法： （一）原理: 与单色法相同，只是在此法中使用