动物组织中氯霉素的残留测定－酶联免疫吸附法.pdfVIP

动物组织中氯霉素的残留测定－酶联免疫吸附法 1　范围 本文件规定了动物肌肉、肝脏、肾脏、尿液、鱼肉、虾肉和禽（鸡、鸭）蛋中氯霉素残留量酶联免 疫吸附测定方法。 本文件适用于动物肌肉、肝脏、肾脏、尿液、鱼肉、虾肉和禽（鸡、鸭）蛋中氯霉素残留量的快速 筛选测定。 2　规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3　原理 残留在物组织中的氯霉素经乙酸乙酯提取，正己烷脱脂后用于酶联免疫测定。试样中的氯霉素抗原 与包被于微孔板中的氯霉素特异性抗体进行免疫竞争性反应，加入一定量的显色底物和终止液，在 450nm处进行吸光度测量，试样中氯霉素的含量与颜色成反比。换算后可以获得样本中氯霉素的含量。 4　试剂和溶液 4.1　除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为符合 GB/T6682 的二级水。 4.2　竞争酶标免疫法氯霉素试剂盒，2℃～8℃冰箱中保存。 4.2.1　微孔板：包被有氯霉素抗体。 4.2.2　氯霉素标准溶液：浓度范围 0 μg/L、0.02 μg/L、0.06 μg/L、0.18 μg/L、0.54 μg/L、1.62 μg/L。 4.2.3　抗体工作液：1 瓶（7 mL ）。 4.2.4　酶标记物工作液：1 瓶（12 mL）。 4.2.5　浓缩样品稀释液：1 瓶（10×，30 mL ）。 4.2.6　浓缩洗涤液：1 瓶（20× ，25 mL ）。 4.2.7　底物 A 液：1 瓶（7 mL ）。 4.2.8　底物 B 液：1 瓶（7 mL ）。 4.2.9　终止液：1 瓶（7 mL ）。 4.3　乙酸乙酯。 4.4　正己烷。 4.5　样品稀释液：取浓缩样品稀释液（4.2.5），用水按 1：9 （V/V ）稀释，混匀。 4.6　洗涤工作液：取浓缩洗涤液（4.2.6），用水按 1：19 （V/V ）稀释，混匀。 4.7　底物 A 、B 混合液：分别取底物 A 液（4.2.7 ）、底物B 液（4.2.8 ），按 1：1 （V/V ）充分混匀，在 5 min 内使用，避免搅拌，避免使用金属容器盛装。 5　仪器设备 5.1　酶标仪：带 450nm 、630 nm （或620 nm ）滤光片。 5.2　分析天平：感量 0.01g 。 1 5.3　匀浆机：≥10 000 rpm。 5.4　离心机：≥5 000 rpm 。 5.5　振荡器。 5.6　冰箱。 5.7　氮吹仪。 5.8　微量加样器及配套吸头：（单道 20μL ，50μL，100μL，多道 50μL～300μL ）。 6　试样制备 6.1　样品处理 6.1.1　动物肌肉、肝脏、肾脏、鱼肉、虾肉 动物肌肉、肝脏、肾脏，去筋膜，鱼去鳞去骨去内脏，取皮和肌肉部分，虾去头去壳去肠腺，上述 样品切成小块，制成糜状，10 000 rpm均质2 min ，取3 g± 0.05 g均质样品，加入6mL 乙酸乙酯（4.3 ）， 充分涡动2 min ，室温4000g离心10min，取4mL上层乙酸乙酯层于新的离心管中，50℃～60℃水浴中， 氮气吹干；残留物用2 mL正己烷（4.4 ）溶解，充分涡动10 s，再加入1 mL 样品稀释液（4.5 ），低速涡 动1 min，4000 g 以上离心5 min，完全弃去上层正己烷及中间层杂质，取50 μL下层水相进行测定。 6.1.2　禽（鸡、鸭）蛋 禽（鸡、鸭）蛋，去壳，将蛋清和蛋黄搅拌均匀，取3 g± 0.05 g均质样品，加入6mL 乙酸乙酯 （4.3 ），充分涡动2 min ，室温4000g离心10min，取4mL上层乙酸乙酯层于新的离心管中，50℃-60℃水 浴中，氮气吹干；残留物用2 mL正己烷（4.4 ）溶解，充分涡动10 s，再加入1 mL 样品稀释液（4.5 ）， 低速涡动1 min，4000 g 以上离心5 min，完全弃去上层正己烷及中间层杂质，取50 μL下层水相进行测定。 6.1.3　尿液 取0.1 mL 新鲜样品（冷冻或冷藏样品恢复至室温），加入到0.3 mL 去离子水中，涡动10 s混匀；取 50 μL 进行检测。 6.2　样品贮存 将试样按照测试和备用分