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naac-kalso42显色法测定玫瑰花米中总黄酮的研究 蝗虫米（又名蝗虫米）是一种常见的中药。其主要成分是黄酮类化合物，包括芦丁和水煮后产生的辅素。黄酮类化合物是自然界广泛存在的自然产物。它可以扩张冠状动脉，减少血脂，增加脑血流。它对心脏的血管循环起到了显著的治疗作用。黄酮总含量的测定包括高效液相色谱法、毛细管电泳法、化学发光法、分光光度法和激励动态光度法。在这项工作中，我们提出了一种新的显色系统，即使用芦丁作为标准品，用nac-kal（so4）2作为显色剂测定蝗虫大米中黄酮的总含量。与文献中的显色系统相比，该方法的结果表明具有显著的改进性。结果表明，在nac-kal（so4）-worm法中，黄酮含量的显色稳定性好，渗透性高。在这项工作中，我们研究了提取昆虫和大米中黄酮物质的最佳提取条件。 1 实验部分 1.1 u3000仪器 721型分光光度计(上海第三分析仪器厂);SSY4型电热恒温水浴锅(北京泰克仪器有限公司);G8023CTL型微波炉(佛山市顺德区格仕兰微波炉电器有限公司);雷磁pHS-3C型精密pH计(上海精密科学仪器有限公司). 芦丁标准溶液:精确称取0.020 0 g芦丁(生化试剂BR,国药集团化学试剂有限公司),用30%的乙醇溶液微热溶解,并完全转移入100 mL容量瓶中,再用30%的乙醇溶液稀释至刻度,配制成0.2 g·L-1的储备液,用时稀释成20 mg·L-1的标准液,4 ℃以下冰箱内保存.乙醇:30%;氢氧化钠:1.0 mol·L-1;醋酸钠:0.2 mol·L-1;硫酸铝钾:0.05 mol·L-1;吐温40:1.0 g·L-1.实验所用试剂除芦丁外均为分析纯,分析用水为蒸馏水. 1.2 硫酸钠标准地溶液的制备 准确吸取一定量的芦丁标准液于25 mL的容量瓶中,依次加入30%的乙醇溶液5.00 mL、0.2 mol·L-1的醋酸钠溶液2.00 mL,摇匀放置5 min后加入0.05 mol·L-1的硫酸铝钾溶液1.00 mL,再摇匀放置6 min后依次加入1.0 mol·L-1的氢氧化钠溶液5.00 mL、1.0 g·L-1的吐温40溶液3.00 mL,最后用30%的乙醇溶液稀释至刻度,置于1 cm比色皿中在420 nm波长处,以空白溶液为参比液测定吸光度. 2 结果与讨论 2.1 测定波长的确定 准确吸取两份2.50 mL的芦丁标准溶液,置于两个25 mL容量瓶中,一份加入吐温40,另一份不加入吐温40,按1.2步骤操作,在350～500 nm波长范围内测定吸光度值,绘制吸收曲线,见图1.由图1可知,显色体系最大吸收波长为430 nm,吐温40对该体系有增敏作用,并使体系最大吸收波长紫移至420 nm.故实验选定测定波长为420 nm. 2.2 显色体系的选择 准确吸取芦丁标准溶液2.50 mL,置于25 mL容量瓶中,加入30%的乙醇溶液5.00 mL,分别以亚硝酸钠-硝酸铝、醋酸钠-硝酸铝、亚硝酸钾-硫酸铝钾、醋酸钠-硫酸铝钾为显色剂,在碱性条件下显色.经测定,只有以醋酸钠-硫酸铝钾为显色剂时,显色稳定、灵敏度高,故选用在碱性条件下以醋酸钠-硫酸铝钾为显色剂.在选定的显色体系中,在其他条件不变的情况下,分别改变醋酸钠、硫酸铝钾的用量,按照1.2实验方法测定其吸光度,结果表明:NaAc的用量对吸光度的影响不太明显,在本实验中用量定为2.00 mL,KAl(SO4)2的最佳用量为1.00 mL. 2.3 体系的ph值对吸光度的影响 用1.0 mol·L-1的H2SO4溶液和1.0 mol·L-1的NaOH溶液调整显色体系的pH值,并按照1.2实验方法测定其吸光度,见图2.结果表明:当pH值大于9.0以后,酸碱度对吸光度的影响不明显,并且较之pH8时的吸光度有显著提高,因此选择在显色体系中加入1.0 mol·L-1的NaOH溶液5.00 mL,以保证其pH值在13.0左右. 2.4 表面活性剂的用量 按照1.2实验方法,在其他条件不变的情况下,分别加入1.0 g·L-1的不同种表面活性剂,测定其吸光度大小,结果表明,对显色体系有增敏作用的表面活性剂为吐温40,其最佳用量是3.00 mL. 2.5 不同温室下水浴中显色体系的稳定性 准确吸取2.50 mL芦丁标准溶液于25 mL容量瓶中,分别在25 ℃和35 ℃恒温水浴中,按照1.2实验方法操作,分别在不同时间测定其吸光度,结果表明:室温范围内,显色体系迅速显色并在50 min内稳定不变. 2.6 压力值 对0.8 mg/L的芦丁进行测定时,当相对误差控制在≤±5%,下列倍量的离子不干扰测定: Ni2+、Zn2+、Mn2+、Co2+、Cu2+、VO+2、Tb3+、Eu3+、Sm3+、Au3+为50倍;葡萄糖、蔗糖、麦芽糖、果糖、水杨酸、酒石酸、柠檬酸