3,5-二硝基水杨酸ds比色法测定木糖含量的条件优化.docxVIP

3,5-二硝基水杨酸ds比色法测定木糖含量的条件优化 木糖是从植物中提取的食品添加剂。纯净的木糖外观为白色结晶或粉末,似绵白糖。发热量相当于葡萄糖,甜度相当于蔗糖。由于木糖在新陈代谢中不需要胰岛素的促进,能直接通过细胞膜进入细胞组织,所以是糖尿病患者很好的营养剂和辅助治疗剂,也是国外很多疗效食品,健美食品中很重要的基料。木糖不被口腔中的细菌发酵,在口腔中不产生酸,具有良好的防龋功能,是口香糖、儿童食品、保健食品的理想甜味剂。 目前世界对木糖和木糖醇的消费量为每年2万多t,主要用于防龋齿食品,中国年产1万多t(能力3万t),出口1万多t,是世界第一生产和出口大国,占世界贸易量50%以上,有些国家从中国进口原料,再加工出口。但现在我国还没有木糖测定的统一标准,造成测定上的不统一。试验采用3,5-二硝基水杨酸比色法,此方法具有准确性高、重现性好、方法简单,尤其适用于大批量样品的测定等特点。 1 材料和方法 1.1 试验材料和设备 木糖,3,5-二硝基水杨酸;UV757CTR紫外可见分光光度计。 1.2 溶液及其配置 1.2.1 -二苯基水杨酸cr 酒石酸钾钠(AR):182 g溶于500 m L蒸馏水中,加热。在热溶液中依次加入:3.5-二硝基水杨酸(CR):6.3 g;2 mol/L的Na OH(AR)溶液:262 m L或Na OH(AR):20.96 g;苯酚(AR):5m L;Na2SO3(CR):5 g。搅拌溶解后、冷却定容1 L,贮于棕色瓶中一周后使用。 1.2.2 标准物质：木糖溶液 1.3 测试方法 1.3.1 最大吸收波长的确定 精确移取木糖标准液、蒸馏水各1 m L,分别置于25 m L比色管中,再各加1 m L DNS试剂,反应液显色后在400~700 nm波长下进行扫描,选择最大吸收所在波长为测定波长。 1.3.2 量的选择,计算者4. 为了保证显色完全,采用高浓度木糖的标准液来进行DNS用量的选择。准确吸取1m L的木糖标准液,加入25 m L比色管中,并分别加入0、0.5、1、1.5、2、3、4 m L DNS于比色管中,加水约25 m L,步骤同上。 1.3.3 显色时间的确定 取1 m L木糖溶液置于25m L的比色管,加DNS显色液在沸水浴中进行不同时间的显色,流水迅速冷却,定容摇匀以空白调零。 1.3.4 稳定时间的确定 准确吸取木糖标准液1 m L和DNS试剂3 m L,加入比色管,步骤同上。显色后放置不同时间后测定吸光值。 1.3.5 木糖标准曲线的绘制 取0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9,1.0 mg/m L的木糖标准溶液各1 m L,分别置于25 m L比色管中,各加3 m L DNS液置沸水浴中煮一定时间,流水迅速冷却,定容摇匀,在最大吸收波长处测吸光度,绘制木糖含量与吸光度的曲线关系,并讨论其相对误差。 1.3.6 重复试验 以木糖受试样品做6个平行样,测定其糖含量,以此来考查测定方法的精密度并计算标准偏差。 1.3.7 样品取样性能 以木糖样品采用标准品随行对照法分别加入不同量的标准木糖溶液,按照1.3.5的方法操作分别测定木糖含量并计算回收率。 2 结果与分析 2.1 测量条件的研究 2.1.1 ds-b/gc-ms扫描 用UV757CRT双光束紫外可见分光光度计在波长为400~700 nm范围内,对反应生成的氨基化合物(空白调零)以及DNS液(蒸馏水调零)的吸收光谱进行了扫描,扫描结果见图1、图2。入射光的波长应根据吸收光谱曲线,以选择溶液具有最大吸收时的波长为宜。 由图1、图2可知,显色剂在测定波长处无明显吸收,故选λmax=490 nm为合适。 2.1.2 木糖标准溶液的制备 精确移取DNS试剂0、0.5、1、1.5、2.0、2.5、3.0、4.0 m L于25 m L比色管中,准确加入木糖标准溶液,沸水浴后,流水冷却,定容,在490 nm处比色,结果见图3。 由图3可看出,在DNS用量小于3 m L时,随着其用量的增加,显色液的吸光度显著增大,大于3m L时,吸光度增大不明显,故DNS用量应不小于3m L,且用量应尽量保持一致。 2.1.3 最大吸收时间无定时 从表1可看出,反应时间为10 min时吸光度开始明显增大,10~15 min显色基本完全,吸光度趋于稳定一致,但超过15 min后,随着时间的增加,吸光度开始明显降低。本试验确定的最佳沸水浴显色时间为10~15 min。 2.1.4 显色稳定性 为了中止反应,反应结束后立即采用流水冷却。从图4可以看出,随着时间的延长,吸光度略有降低,但在20 min内显色基本稳定。 2.1.5 测量误差的控制 以木糖为基准物配制成浓度依次递增的系列标准溶液,按最佳条件测定吸光度值。木糖含量