利用dsRNA体外饲喂和转基因水稻沉默褐飞虱相关基因的研究的中期报告.docxVIP

利用dsRNA体外饲喂和转基因水稻沉默褐飞虱相关基因的研究的中期报告 研究目的： 本研究旨在利用dsRNA体外饲喂和转基因水稻的方法，沉默褐飞虱相关基因，探索这种技术在防治褐飞虱中的应用价值。同时，通过实验观察和数据分析，评估该方法的可行性、有效性及安全性。 研究方法： 1.选取2个褐飞虱相关基因作为靶点：cpsf1和jheh。利用基因克隆技术，制备dsRNA并进行酵素消化，确定dsRNA的长度。 2.将这些dsRNA注入内脏腔中，或者将这些dsRNA与水稻叶片一起进行混合，利用自制的装置进行体外饲喂。目的在于沉默褐飞虱相关基因。 3.采集不同时期的褐飞虱样品，提取RNA并进行qPCR实验，检测dsRNA的转染效率和目标基因的表达水平。 4.构建cpsf1和jheh转基因水稻植株，或者在大自然中让转化的水稻进行自然受粉。收集转基因和非转基因水稻的种子，进行PCR检测、遗传分析及生长状况观察，评估该方法的安全性并验证转基因水稻是否沉默了褐飞虱基因。 研究进展： 1.成功克隆了cpsf1和jheh基因，并通过酵素消化确认了dsRNA的长度。 2.通过体外饲喂的方法将dsRNA注入褐飞虱内脏腔中，取样后提取RNA并进行qPCR实验，发现转染效率较低，但成功沉默了目标基因，表达水平较对照组显著降低。 3.针对褐飞虱体外饲喂dsRNA的效果较差，我们开始尝试将dsRNA与水稻叶片混合，进行体外饲喂，进而优化实验方案。 4.构建了cpsf1和jheh转基因水稻，通过PCR检测、遗传分析及生长状况观察，初步评估了该方法的安全性，并发现转基因水稻的种子可以沉默褐飞虱相关基因。 结论： 本研究初步探索了利用dsRNA体外饲喂和转基因水稻沉默褐飞虱相关基因的方法。实验结果显示dsRNA沉默效率较低，但是在转基因水稻中具有一定的应用价值。未来，我们将进一步完善实验方案，提高dsRNA转染效率，并验证该方法在自然环境中的应用效果。