一测多评法测定香砂六君丸中的两种木香内酯类成分.docxVIP

一测多评法测定香砂六君丸中的两种木香内酯类成分 采用一测多评价法（quantima）是在对中药多指标质量进行评价时，以样品的典型组分（或接近样品的其他组分）作为内标，建立该组分和其他组分之间的相对校正因子（rcf），并通过相对校正因子计算其他组分的含量。对于较少的对照品或制备成本高或不稳定的情况，采用一测多评价法。 香砂六君丸(浓缩丸)由木香、砂仁、白术、陈皮、茯苓、半夏、党参、炙甘草、生姜、大枣等十味中药组成,主要起益气健脾、和胃行气作用,其中木香是君药,其主要成分是木香烃内酯、去氢木香内酯两个内酯类成分。《卫生部药品标准》中无木香质量测定指标。为更好控制其质量,节约对照品,提高检测效率,本试验以相对易得的木香烃内酯为内标,采用一测多评法建立去氢木香内酯的含量测定方法,并将一测多评方法与常规外标法进行比较,现报道如下。 1 药物、试剂和仪器 Agilent 1200型高效液相色谱仪;岛津LC-2010A高效液相色谱仪;Ultimate XB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);Hyperclone C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);Waters sunfire C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);BP211D电子天平(德国塞多利斯股份公司);KQ5200DE数控超声波提取器(昆山市超声仪器有限公司)。木香烃内酯(批号:111524-201107)、去氢木香内酯(批号:111525-201008)对照品均购自中国食品药品检定研究院,纯度100%;甲醇为色谱纯,水为超纯水,其他试剂均为分析纯,香砂六君丸(浓缩丸)样品(批号:111002、111202、120203)为市售品(河南省宛西制药股份有限公司)。 2 方法和结果 2.1 流动相、流速和检测波长 色谱柱:Ultimate XB-C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:甲醇-水(68:32);柱温25℃;流速:1.0 ml·min-1;检测波长225 nm。上述色谱条件下,各组分分离度良好,结果见图1。 2.2 对照品储备液制备 精密称取木香烃内酯对照品12.97 mg、去氢木香内酯对照品9.94 mg分别置50 ml量瓶中,各加甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,制得各对照品储备液适量。再分别精密吸取上述各对照品储备液8 ml置同一25 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即得混合对照品溶液(木香烃内醋83.01μg·ml-1、去氢木香内酯63.62μg·ml-1)。 2.3 供试品溶液制备 取香砂六君丸约5 g,研细(过五号筛),取粉末约0.5 g,精密称定,置100 ml锥形瓶中,精密加入甲醇25 ml,称定重量,超声处理(300 W,50 kHz)30min,取出,放冷,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,取续滤液作为供试品溶液。按香砂六君丸的处方和制法,依法制成不含木香的阴性样品,并按供试品溶液制备方法制成阴性样品溶液。 2.4 方法研究 2.4.1 标准曲线及线性范围 精密移取混合对照品溶液2.5,5.0,10.0,15.0,20.0,25.0 ml置50 ml量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,滤过,分别精密取20μl注入液相色谱仪,以进样量对峰面积积分值进行线性回归,得回归方程:木香烃内酯Y=2.13×103X+4.44(r=0.999 8),去氢木香内酯Y=1.43×103X+0.69(r=0.999 9),表明木香烃内酯在0.083～0.830μg、去氢木香内酯在0.064～0.636μg线性关系良好。 2.4.2 景观内容分析 精密吸取混合对照品溶液10μl,重复进样6次,记录色谱峰,计算木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积的RSD分别为0.31%、0.25%。2.4.3稳定性试验取同一份香砂六君丸(批号:120203)约5 g,研细(过五号筛),取粉末约0.5 g,精密称定,制备供试品溶液,分别于制备后0,2,4,8,12,24 h进样20μl,记录色谱峰,计算得木香烃内酯和去氢木香内酯峰面积的RSD分别为0.56%、0.39%,表明供试品溶液在24 h内稳定性良好。 2.4.4 供试品溶液及测定 取同一批香砂六君丸(批号:120203)约5 g,研细(过五号筛),取粉末约0.5 g,共6份,精密称定,分别制备供试品溶液,分别进样20μl,测定木香烃内酯、去氢木香内酯峰面积并计算含量及RSD。结果表明,供试品中木香烃内酯、去氢木香内酯含量分别为0.453 6,1.210 3 mg·g-1,RSD分别为0.96%、1.3%。 2.4.5 加样回收试验 取已知含量的同一批香砂六君丸(批号:120203)粉末0.25 g,共6份,分别加入木香烃内酯对照品