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酶联免疫吸附试验诊断技术
61、辍学如磨刀之石,不见其损,日有所亏。
62、奇文共欣赞,疑义相与析。
63、暧暧远人村,依依墟里烟,狗吠深巷中,鸡鸣桑树颠。
64、一生复能几,倏如流电惊。
65、少无适俗韵,性本爱丘山。
一、免疫检测的基础知识
(一)抗原
(二)抗体
(三)抗原抗体反应
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(一)抗原(Antigen Ag)
抗原是能在机体中引起特异性免疫应 答的物质。可刺激机体产生体液免疫(抗 体)和引起细胞免疫(细胞因子)。能在 机体中产生抗体的抗原多为分子量大于 5000D的蛋白质,例如禽流感、新城疫、猪 瘟、口蹄疫等病毒。
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(二)抗体(Antibody Ab)
抗体是能与抗原特异性结合的免疫球蛋白 (immunoglobulin, Ig)。 Ig分五类,即 IgG、IgA、IgM、IgD和IgE。与免疫测定 有关的Ig主要为IgG和IgM。
抗体的产生
机体受抗原刺激后, B淋巴细胞产生相应 的抗体,含有抗体的血清称为抗血清( antiserum)。
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(三)抗原抗体反应
1、特异性结合并可逆
抗原与抗体结构可以形成特异性的抗原 抗体复合物,此过程是可逆的。
2、最适比例:前带和后带现象
3、敏感性
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(一) ELISA的基本原理
(二) ELISA的类型
二、 ELISA试验的原理
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底物现色
酶标复合物
样品稀释
包被(抗原或抗体)
ELISA(间接)的操作步骤
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P
E
1、间接法测抗体
2、双抗原夹心法测抗体
3、双抗体夹心法测抗原
4、竞争法测抗体
5、竞争法测抗原
6、捕获包被法测IgM抗体
7、液相阻断ELISA法 (FMD)
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三、酶联免疫吸附试验的特点
(一)灵敏度高
(二)特异性强
(三)简便、快速
(四)重复性好
(五)自动化程度高,适合大批量标准化检测
(六)安全
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