DB51T 2403-2017野生大熊猫粪便样品采集及DNA提取技术规程.docxVIP

ICS 65.020.40 B 61 DB51 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 2403—2017 野生大熊猫粪便样品采集及 DNA 提取技术规程 2017 - 09 - 19 发布 2017 - 10 - 01 实施 四川省质量技术监督局 发 布 I DB51/T 2403—2017 目 次 前 言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 采样频次、时间和样线设计 1 5 粪便样品的采集和保存方法 2 附录 A（规范性附录） 大熊猫粪便样品采集记录表 4 附录 B（规范性附录） 四川各保护区大熊猫粪便样品编号 5 II DB51/T 2403—2017 前 言 本标准根据 GB/T 1.1-2009《标准化工作导则 第1部分：标准的结构和编写》的规定编写。 本标准由四川省林业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：四川省野生动植物资源保护管理站 本标准主要起草人：岳碧松 魏辅文 张和民 沈富军 杨旭煜 古晓东 1 DB51/T 2403—2017 野生大熊猫粪便样品采集及 DNA 提取技术规程 1 范围 本标准规定了野生大熊猫新鲜粪便采集和 DNA 提取技术规程。 本标准适用于四川省野生大熊猫新鲜粪便样品采集和DNA提取。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件， 仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 DB51/T 2288-2016 野生大熊猫种群动态监测技术规程 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 3.1 大熊猫栖息地 habitats of giant panda 是指适合于大熊猫生活的环境范围。 3.2 G IS Geographic Information System 地理信息系统 4 采样频次、时间和样线设计 4.1 采样频次与时间 野生大熊猫新鲜粪便样品采集可在春季化雪后（繁殖季节） 和冬季积雪前（非繁殖季节） 开展； 对 于交通比较方便的大熊猫分布密集区，可以根据具体情况和研究目标增加采样次数。 各地可根据当地大熊猫的习性以及当地的物候、气候、大熊猫主食竹发笋规律、野外工作条件和后 勤保障等因素，确定具体采样时间。 野外采样工作应尽量在最短时间内完成， 一般为10-15天。 4.2 采样路线 以1:5万电子地图或遥感卫星图片为基本工作图，以全国第四次大熊猫调查结果为依据， 采用GIS 方法将保护区大熊猫栖息地划分为若干个面积为2 km2 的网格，每个网格作为1个采样小区，并编号。 取样小区的划分尽量与全国第四次大熊猫调查保持一致。 2 DB51/T 2403—2017 在单个小区内， 根据地形、地貌、道路、河流、植被、大熊猫主食竹等因素， 以最短的距离覆盖最 多的生境类型为原则， 布设实际采样路线， 样线长度不得少于1.5 km，尽量形成“S”形或“Z”形路线。 5 粪便样品的采集和保存方法 5.1 采样工具 手持终端设备、GPS定位仪、罗盘、地形图、记录表格、一次性PE手套、封口袋、500ml塑料样品瓶、 无水乙醇、标记笔、铅笔、标签纸、标记胶带、GPS数码照相机等。 5.2 粪便新鲜程度判定 以大熊猫粪便表面是否有粘液和粘液的光泽、粪便完整程度、颜色以及气味等判断大熊猫粪便的新 鲜程度，其中以大熊猫粪便表面附有粘液为主要标准。 1天以内：粪便颜色保持绿色或与调查季节竹子颜色相近、表面有明显粘液、且向光和贴近地面一 侧的粘液光泽基本无差异。 2-5天：粪便颜色与调查季节竹子颜色相近，表面有较多粘液，向光一面的光泽消失或不明显、贴 近地面一侧的表面有光泽。 6-10天：粪便颜色接近深绿色，表面有少量粘液，向光一面的表面无光泽。 5.3 粪便样品的选取原则 应尽量采集5天以内的大熊猫新鲜粪便，在寒冷干燥季节，可采集6-10天的粪便样品。10天以上的 粪便不采集。 同一堆粪便只采集一份样品； 当多堆新鲜粪便距离较近时，即使判定为同一只熊猫， 也可采集多份样品，以增加DNA量，但需 在记录表中加以注明。 直线距离100 m以上的新鲜粪便都要进行采样，以确保DNA提取成功和充足的DNA量； 若遇到大熊猫求偶交配场地（通常出现在3-5月），采集原则为近距离、高强度采样，即使粪堆较 近，也应分别采集； 若遇到疑似大熊猫母幼粪便样品， 应分开采集粪便； 依据母幼大熊猫粪便大小有明显差异作出判断。 5.4 样品采集方法 采集大熊猫新鲜粪便样品时， 应佩戴一次性PE手套。禁止直接用手