DB51T 2467-2018鲫疱疹病毒II型病诊断技术规程.docxVIP

1 ICS 65.150 B 52 DB51 四 川 省 地 方 标 准 DB51/T 2467—2018 鲫疱疹病毒 II 型病诊断技术规程 2018 - 04 - 18 发布 2018 - 05 - 01 实施 四川省质量技术监督局 发 布 I DB51/T 2467—2018 目 次 前 言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 试剂和材料 2 5 设备和器械 2 6 临床检查 2 7 实验室样品采集 2 8 病毒的分离 2 9 病毒鉴定 3 10 综合判定 4 附录 A（规范性附录） 试 剂 配 方 5 附录 B（资料性附录） CyHV-2 解旋酶基因参考序列（1446bp） 6 II DB51/T 2467—2018 前 言 本标准依据 GB/T 1.1-2009 给出的规定进行编写。 本标准中附录A为规范性附录、附录B为资料性附录。 本标准由四川省农业厅提出并归口。 本标准由四川省质量技术监督局批准。 本标准起草单位：四川农业大学。 本标准起草人：耿毅、余泽辉、陈德芳、邓梦玲、黄小丽、欧阳萍、郑李平。 1 DB51/T 2467—2018 鲫疱疹病毒 II 型病诊断技术规程 1 范围 本标准规定了鲫疱疹病毒II型病诊断的术语与定义、试剂和材料、临床检查、实验室样品采集、病 毒分离、病毒鉴定和综合判定等技术规程。 本标准适用于鲫（Carassius auratus）与金鱼疱疹病毒II型病的诊断。 2 规范性引用文件 下列文件对于文件的应用时必不可少的。凡是注日期的应用文件，仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 GB/T 6682 分析实验室用水规格和实验方法 GB/T 18088 出入境动物检疫采样 SC/T 7014 水生动物检疫实验技术规范 SC/T 7103 水生动物产地检疫采样技术规范 3 术语和定义 下列术语和定义适用于此文件。 3.1 鲫疱疹病毒 II 型 Cypr inid herpesvirus 2， CyHV-2 是一种感染鲫鱼及其变种（金鱼、异育银鲫与彩鲫等） 的高致病性病毒， 又称金鱼造血器官坏死病 毒(Goldfish haematopoietic necrosis virus, GFHNV）或疱疹病毒性造血器官坏死病病毒（Herpesviral haematopoietic necrosis virus, HVHNV）。 3.2 巢氏 PCR Nested Polymerase Chain Reaction 巢氏聚合酶链氏反应。 3.3 CPE Cytopathic effect 细胞病变效应。 3.4 GFF Goldenfish fin 金鱼鳍细胞系。 2 DB51/T 2467—2018 4 试剂和材料 4.1 水 用水应符合 GB/T 6682 中一级水的规格。 4.2 试剂与培养基 按 GB/T 4789.28 与 SC/T 7014 规定执行，金鱼鳍细胞系（GFF）、小牛血清（FBS）、M199营养 液、青霉素、链霉素。Taq酶、dNTPs、Mix-reaction buffer、DNA分子量标准参照物（1000bp DNA Maker） 与核酸提取试剂盒选用专业试剂公司提供的商品化试剂，上述未提及的见附录A。 4.3 巢氏 PCR 引物 DNA 解 旋 酶 基 因 巢 氏 PCR 扩 增 引 物 外 ， P1-F ： 5’-TGAAATGTCAAAAGTGGATGG-3’ ， P1-R ： 5’-TATTCCCAGACAGCCTTCAAA-3’，扩增片段大小716bp； 内引物，P2-F：5’-GAACACCGCTGCTCATCATC-3’，P2-R：5’-ACTCTTCGCAAGTCCTCACC-3’，扩增片段大 小357bp。 - 20℃保存。 5 设备和器械 主要设备与器械如下： 解剖盘、剪刀、镊子和手术刀、组织匀浆器、普通光学显微镜、电子天平、高压灭菌锅、超净工作 台、一次性滤器（0.22μm）、普通冰箱、超低温冰箱、倒置显微镜、高速冷冻离心机、微量移液器、PCR 扩增仪、水平电泳系统、凝胶成像系统与CO2培养箱等。 6 临床检查 6.1 临床症状 病鱼离群独游，摄食减少或停止摄食，常在池塘边呈浮头状缓慢游动。 6.2 外部检查 病鱼体表出血， 尤其以口、鳃盖、眼球周围、下颌、鳍