DB51T 2708-2020副猪嗜血杆菌防治技术规范.docxVIP

ICS 65.020.30 CCS B 41 四 DB51 川 省 地 方 标 准 DB51/T 2708—2020 副猪嗜血杆菌防治技术规范 2020 - 10 - 21 发布 2020 - 12 - 01 实施 四川省市场监督管理局 发 布 目 次 前言 Ⅲ 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 诊断 1 5 预防 2 6 治疗 3 前 言 本文件按照*%/7 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件由四川省农业农村厅提出、归口并解释。 本文件由四川省市场监督管理局批准。 本文件起草单位：四川省畜牧科学研究院。 本文件主要起草人：康润敏、于吉锋、谢晶、曹冶、魏勇、林毅、廖党金、叶勇刚、李兴玉、肖璐、 叶健强、潘梦、戴卓建、张先惠。 副猪嗜血杆菌防治技术规范 1 范围 本文件规定了副猪嗜血杆菌病的术语和定义、 诊断、预防和治疗方法的要求。 本文件适用于四川省行政范围内副猪嗜血杆菌病的诊断和防治。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件。不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T 3075 畜禽养殖场消毒技术 NY 5027 无公害食品 畜禽饮用水水质 NY/T 5030 无公害农产品 兽药使用准则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 副猪嗜血杆菌病 副猪嗜血杆菌病又称格拉泽氏病。是由副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis, HPS）所引发的猪 一种泛嗜性细菌性传染病， 各年龄段猪均可发病， 主要影响断奶前后和保育阶段猪， 临床特征以多发性 浆膜炎，如关节炎、胸膜炎、心包炎、腹膜炎和伴发肺炎为主。 4 诊断 4.1 流行特点 病猪和病原携带猪是主要传染源，经呼吸道传播， 当猪群中存在呼吸道疾病或饲养环境不良时本病 易多发；断奶、转群、混群或运输也是常见的诱因。副猪嗜血杆菌只感染猪，断奶前后和保育阶仔猪易 感，常见于2～8周龄的仔猪， 断奶后 10～40d 出现发病峰值。 4.2 临床症状 4.2.1 急性型 高热， 体温达40℃~41℃,食欲减退及厌食，咳嗽、呼吸困难， 关节肿胀、跛行、步态僵硬， 同 时出现身体颤抖，共济失调等神经症状， 可视粘膜发绀。 4.2.1 慢性型 消瘦， 被毛粗乱，精神萎靡，咳嗽， 呼吸困难、呼吸频率和深度都显著增加，腹式呼吸， 关节发炎甚至肿大， 病猪站立困难， 不愿行走，呈侧卧状态。 4.3 病理变化 胸膜肺炎， 胸膜腔积液、肺部被纤维蛋白膜包裹， 腹膜存在纤维蛋白沉淀， 浆液性、纤维素性渗出 特征明显， 心包积液、心包内常见干酪样渗出物与心脏粘连形成“绒毛心”，全身淋巴结肿大出血， 关 节肿大，有浆液性渗出性炎症。 4.4 实验室检测 4.4.1 细菌分离培养 无菌采集病料接种含1 μg/mL NAD和5%小牛血清的胰蛋白大豆琼脂培养基（Tryptic Soy Agar，TSA）， 37℃培养 24～48 h，经 48 h培养后可见不溶血、半透明、圆形隆起、边缘整齐、光滑湿润、直径约1-2mm 的菌落。革兰氏染色镜检可见呈短杆状、长线状等多种形态阴性杆菌。 5 将TSA平板上疑似菌落与金黄色葡萄球菌垂直划线无NAD的鲜血琼脂平板，37℃培养 24～48 h，可在 金黄色葡萄球菌周围长出“卫星现象”。 4.4.2 生化鉴定 将纯培养疑似副猪嗜血杆菌接种含1 μg/mL NAD的葡萄糖、蔗糖、半乳糖、麦芽糖、甘露醇等微量 生化鉴定管， 置体积分数 5%CO2培养箱， 37℃培养 24 h。副猪嗜血杆菌接触酶试验和硝酸盐还原试验 为阳性，能发酵葡萄糖、麦芽糖、木糖、阿拉伯糖、蔗糖、果糖等碳水化合物。 4.4.3 聚合酶链式反应（PCR） 模板制备： 挑取单菌接种含1 μg/mL NAD和5%小牛血清的TSB液体培养基，37℃摇床中160 r/min 上震荡培养12～16 h，采用商品话细菌DNA提取试剂盒提取。 引物合成： 采用副猪嗜血杆菌16S rDNA序列中一段合成上游引物： 5’-GTGATGAGGAAGGGTGGTGT-3’， 下游引物： 5’-GGCTTCGTCACCCTCTGT-3’，片段长度约821bp。 反应体系（25μl）：2倍PCR Mix 12.5 μl,上游引物1.0 μl，下游引物1.0 μl，模板2.0 μl，ddH2O 9.5 μl。 反应条件： 94℃变性3 min；94 ℃ 30 s ，55℃