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- 2023-11-17 发布于上海
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甲基转移酶抑制剂AdOx对细胞多能性相关基因调控的研究的中期报告
甲基转移酶抑制剂AdOx是一种能够抑制DNA甲基化修饰的化合物,其具有良好的细胞渗透性和生物稳定性,在细胞培养体系中被广泛应用于研究DNA甲基化与基因表达调控之间的关系。本研究旨在探讨AdOx对细胞多能性相关基因调控的影响,以期为细胞重编程和干细胞治疗提供理论基础和实验依据。
目前,我们已经完成了实验的前期准备工作,并对AdOx处理的细胞进行了初步实验。具体实验步骤如下:
1. 细胞培养:选用小鼠胚胎成纤维细胞(MEF)和人类胚胎干细胞(hESC)作为实验对象,分别在细胞培养基中进行培养,并进行传代。
2. AdOx处理:将MEF细胞和hESC细胞分别种于96孔板中,将AdOx溶液加入细胞培养基中,使其终浓度为0.2μM。同时设置负对照组和阳性对照组。
3. RNA提取:将AdOx处理后的MEF细胞和hESC细胞收集,进行三次RNA提取,采用Trizol方法,并进行质量和纯度检测。
4. RT-qPCR:利用RT-qPCR技术检测细胞多能性相关基因表达的变化,包括Oct4、Nanog、Sox2、Klf4和c-Myc等。
目前,我们已经完成了前期培养工作和细胞处理工作,正在进行RNA提取和RT-qPCR分析。初步结果表明,AdOx处理后,MEF细胞和hESC细胞中多能性相关基因的表达发生了显著变化,其中Nanog、So
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