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植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白含量的测定 一、目的 衰老是植物在长期进化和自然选择中形成的一种生物学现象，它可以在植物的细胞、器 官和整体等不同水平上表现出来。植物叶片衰老过程中，叶绿素含量下降，叶色变黄，蛋白 质含量减少。另外自由基代谢失调并在体内积累也是植物衰老的机理之一。本实验主要是测 定植物衰老过程中叶片蛋白质的变化，掌握植物体内可溶性蛋白和非可溶性蛋白的测定原理 及方法。 二、原理 植物材料经Tris－HCl 缓冲液研磨、离心后，可溶性蛋白质溶于上清液中，非可溶性蛋 白则存在于沉淀部分。将沉淀用碱水解，则会得到非可溶性蛋白的提取液。蛋白质提取液与 考马斯亮蓝G－250 反应呈蓝色。在一定范围内，蛋白质的含量与反应液在595nm 波长的吸 光度呈正比，由此可求出蛋白质的含量。 三、材料、仪器设备及试剂 1. 材料：植物叶片 2. 仪器设备：高速冷冻离心机；分光光度计；恒温水浴；研钵（或组织捣碎机）；试 管；移液管；洗耳球等； 3. 试剂及配制 －1 －1 －1 提取液 （50mmol ·L Tris－HCl，pH7.8，含0.5 mmol ·L MgCl ， 1