细胞生物学翟中和第三章演示文稿.pptVIP

细胞生物学 本文档共80页；当前第31页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 本文档共80页；当前第32页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 2、负染技术 用重金属盐(如磷钨酸)对铺展在载网上的样品染色；吸去染料，干燥后，样品凹陷处铺了一层重金属盐，而凸的出地方没有染料沉积，从而出现负染效果，分辨力可达1.5nm左右。 Negative Stained Actin 本文档共80页；当前第33页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 3、冰冻蚀刻 freeze-etching亦称冰冻断裂。标本置于干冰或液氮中冰冻。然后断开，升温后，冰升华，暴露出了断面结构。向断裂面上喷涂一层蒸汽碳和铂。然后将组织溶掉，把碳和铂的膜剥下来，此膜即为复膜（replica）。 本文档共80页；当前第34页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 ４、电镜三维重构技术 　对样品在不同的倾角拍照，得到图片经处理 后而展现的电子密度图。 电镜三维重构技术与X-射线晶体衍射技术及核 磁共振 分析技术相结合，是当前结构生物学 （Structural Biology）（主要研究生物大分 子空间结构及其相互关系）的主要实验手段。 本文档共80页；当前第35页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 ５、扫描电镜技术 20世纪60年代问世，用来观察标本表面结构。 分辨力为6~10nm，由于人眼的分辨力（区别荧光屏上距离最近两个光点的能力）为0.2mm，扫描电镜的有效放大倍率为0.2mm/10nm=20000X。 本文档共80页；当前第36页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 Scanning electron microscope（ SEM） 本文档共80页；当前第37页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 工作原理：是用一束极细的电子束扫描样品，在样品表面激发出次级电子，次级电子的多少与样品表面结构有关，次级电子由探测器收集，信号经放大用来调制荧光屏上电子束的强度，显示出与电子束同步的扫描图像。 为了使标本表面发射出次级电子，标本在固定、脱水后，要喷涂上一层重金属膜，重金属在电子束的轰击下发出次级电子信号。 本文档共80页；当前第38页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 扫描电子显微镜原理 本文档共80页；当前第39页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 本文档共80页；当前第40页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 人类精子 本文档共80页；当前第41页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 三、扫描隧道显微镜scanning tunneling microscope， 原理：根据隧道效应而设计，当原子尺度的针尖在不到一个纳米的高度上扫描样品时，此处电子云重叠，外加一电压（2mV~2V），针尖与样品之间形成隧道电流。电流强度与针尖和样品间的距离有函数关系，将扫描过程中电流的变化转换为图像，即可显示出原子水平的凹凸形态。 分辨率：横向为0.1~0.2nm，纵向可达0.001nm。 用途：三态（固态、液态和气态）物质均可进行观察。 本文档共80页；当前第42页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 扫描隧道显微镜原理 本文档共80页；当前第43页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 第二节 细胞组分的分析方法 一、用超速离心技术分离细胞器与生物大分子及其复合物 转速为10~25kr/min的离心机称为高速离心机。 转速25kr/min，离心力89Kｇ者称为超速离心机。 目前超速离心机的最高转速可达100000r/min，离心力超过500Kg。 本文档共80页；当前第44页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 超速离心技术： 用途：分离大小相差悬殊的细胞和细胞器。 沉降顺序：核——线粒体——溶酶体与过氧化物酶体——内质网与高基体——核蛋白体。 可将细胞器初步分离，常需进一步通过密度梯离心再行分离纯化。 本文档共80页；当前第45页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 本文档共80页；当前第46页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 密度梯度离心 用介质在离心管内形成一连续或不连续的密度梯度，将细胞混悬液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力场的作用使细胞分层、分离。 类型：速度沉降、等密度沉降。 常用介质：氯化铯、蔗糖、多聚蔗糖。 分离活细胞的介质要求： 1）能产生密度梯度，且密度高时，粘度不高； 2）PH中性或易调为中性； 3）浓度大时渗透压不大； 4）对细胞无毒。 本文档共80页；当前第47页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 Velocity (A) and Equilibrium (B) sedimentation 本文档共80页；当前第48页；编辑于星期二\5点32分 细胞生物学 二、细胞内核酸、蛋白质、糖与脂质等成分的显示