第四章微生物培养基的类型及配制详解演示文稿.pptVIP

2. 自 Plate 上取单一菌落 (方法一：盖子微开遮住培养基，避免空气中菌体掉入) (方法二：plate 反面拿起) 无菌操作 – 取菌技巧 2 本文档共93页；当前第63页；编辑于星期三\15点2分 1. 挤出安全吸球內空气，插上灭过菌之玻璃吸管 2. 向上为吸，向下为放 无菌操作 – 取菌技巧 3 本文档共93页；当前第64页；编辑于星期三\15点2分 1. 调整 Pipetman 刻度 (P1000 吸取范围 200 ~ 1000μl) 2. 插上灭过菌之 Tip (用力插紧) 无菌操作 – 取菌技巧 4 本文档共93页；当前第65页；编辑于星期三\15点2分 3. 按钮压至第一段 (不可压至最底) 4. 深入液面下 2 ~ 4 mm 无菌操作 – 取菌技巧 4 本文档共93页；当前第66页；编辑于星期三\15点2分 7、培养基的灭菌 （1）含糖类或明胶的培养基： 113℃灭菌15分钟或115℃灭菌10分钟。 （2）无糖培养基： 121℃灭菌15~20分钟。 （3）血液、体液和抗生素等以无菌操作技术抽取后再加入冷却至约50℃左右的培养基中。 （4）琼脂斜面培养基应在灭菌后冷至55℃-60℃时取出，再摆置成适当斜面。 本文档共93页；当前第31页；编辑于星期三\15点2分 8、培养基的质量测试 （１）如发现破裂、水分浸入、色泽异常、棉塞被培养基沾染等、均应挑出弃去。并测定其最终pH。 （２）将全部培养基放入36±1°C恒温箱培养过夜，如发现有菌生长，即弃去。 （３）用有关的标准菌株接种1~2管或瓶培养基，培养24～48小时，如无菌生长或生长不好。应追查原因并重复接种一次，如结果仍同前，则该批培养基即应弃去，不能使用。　　 本文档共93页；当前第32页；编辑于星期三\15点2分 9、培养基的保存 （1）基础培养基不能超过两周 （2）生化试验培养基不宜超过一周， （3）选择性或鉴别性培养最好当天使用，倾注的平板培养基不宜超过3天。 本文档共93页；当前第33页；编辑于星期三\15点2分 培养基配制 – 器材 培养基、玻璃器皿天平秤、药匙 本文档共93页；当前第34页；编辑于星期三\15点2分 培养基配制 – 仪器 杀菌锅 (Autoclave) 无菌操作台 (Laminar flow) 本文档共93页；当前第35页；编辑于星期三\15点2分 培养基的配制 – 装水 以量筒装取适当量蒸馏水于玻璃容器中 于玻璃容器上标示培养基名称 本文档共93页；当前第36页；编辑于星期三\15点2分 培养基配制 – 秤药 放上秤药纸並归零 以秤药匙舀出适当量药品 (请看培养基配方上說明) 本文档共93页；当前第37页；编辑于星期三\15点2分 培养基配制 – 溶解培养基 傾倒培养基時小心不要沾到玻璃壁上 本文档共93页；当前第38页；编辑于星期三\15点2分 注意事項 – 配药结束 清理配药桌面与天平 清洗秤药匙，擦干放回 药品放回药品柜 本文档共93页；当前第39页；编辑于星期三\15点2分 培养基配制 – 分装 调整分注器 (Dispensette) 刻度 分装试管 盖上试管盖 本文档共93页；当前第40页；编辑于星期三\15点2分 放入杀菌锅 (Autoclave) 灭菌 培养基配制 – 灭菌 本文档共93页；当前第41页；编辑于星期三\15点2分 加水盖过铁板 放东西 关门 调整温度时间 关紧泻压伐 注意事項 – 杀菌锅的使用 本文档共93页；当前第42页；编辑于星期三\15点2分 注意事項 – 杀菌锅使用 灭菌结束后，等压力降回零时才可打开门 进入杀菌锅 之物品，盖子不可关太紧或太松 本文档共93页；当前第43页；编辑于星期三\15点2分 注意事項 – 杀菌锅使用 拿灭菌后物品请记得带耐热手套 本文档共93页；当前第44页；编辑于星期三\15点2分 培养基配制 – 平板培养基 灭过菌之固体培养基于无菌操作台 (Laminar flow)內倒制平板培养基 (Plate) 日光燈 UV燈 風扇 本文档共93页；当前第45页；编辑于星期三\15点2分 思考题 1、加入培养基中的抑制剂有什么作用，常用的抑制剂有哪些？ 2、在制备培养基时，将各成份溶化时要注意哪些问题？ 3、在制备培养基时，如何进行培养基pH的初步调正？ 4、如何选择培养基的灭菌条件？ 5、如何进行培养基的保存？ 本文档共93页；当前第46页；编辑于星期三\15点2分 第二节、微生物检验的基本操作技术 本文档共93页；当前第47页；编辑于星期三\15点2分