T_CI 121-2023 RNA定量测序技术规程.docxVIP

ICS 07.080 CCS C 04 团 体 标 准 T/CI 121—2023 RNA 定量测序技术规程 The technical procedure of RNA quantitative sequencing 2023 - 08 - 31 发布 2023 - 08 - 31 实施 中国国际科技促进会 发 布 目 次 前言 II 1 范围 1 2 规范性引用文件 1 3 术语和定义 1 4 缩 略语 1 5 质量控制要求 2 6 RNA 核酸样品采集方法 3 7 总 RNA 核酸样品完整度检测 4 8 RNA 建库 5 9 高通量测序仪质控及测序 12 10 数据分析 12 前 言 本文件按照GB/T 1.1—2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。本文件由中国国际科技促进会提出并归口。 本文件起草单位：深圳承启生物科技有限公司、武汉承启医学检验实验室有限公司、暨南大学、华南理工大学、赛哲生物。 本文件主要起草人：张 弓、陈 洋、余 卓、王 鑫、卢少华、金静洁、杜红丽、卢 红、陈 杰。 RNA 定量测序技术规程 范围 本文件确立了用于高通量转录组测序的总RNA核酸类样品的转录组测序和质控全流程，包括样本采集、处理、运输、检测和数据产生和质量评估分析全流程。 本文件适用于从新鲜动植物组织、新鲜可培养细胞、全血和细菌/真菌等样品中提取的真核生物和原核生物的总RNA样本的测序。 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 35537-2017 高通量基因测序结果评价要求 GB/T 40664-2021 用于高通量测序的核酸类样本质量控制通用要求 T/CHIA 21.4-2021 组学样本处理与数据分析标准 第4部分：转录组文库构建 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 高通量基因测序 high-throughput gene sequencing 区别于传统双脱氧（Sanger）测序，一种能够一次并行对大量核酸分子进行平行序列测定的技术， 通常一次测序反应能产出不低于100 Mb的测序数据。[来源：GB/T 30989-2014，3.19] 3.2 转录组定量测序 whole transcriptome quantitative sequencing 是通过新一代测序技术全面测定某一状态下的几乎所有的转录本及基因序列，通过对序列的统计分 析确定每种转录本的量。 3.3 文库 library 通过生物来源的、人工合成的或克隆技术等所得到的一个重建分子群，如基因组文库、互补DNA文库、噬菌体展示肽文库等。 [来源：GB/T 30989-2014，3.5] 3.4 测序片段 reads 高通量测序平台产生的含有碱基序列和质量值的序列片段。 [来源：GB/T 35890-2018，3.2] 3.5 Q30 测序数据中，碱基识别质量值为30的碱基识别准确率为99.9%，或错误率为0.1%。 [来源：GB/T 40226-2021，3.6] 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 RNA：核糖核苷酸（Ribonucleic acid） DeoxyriboNucleic acid） rRNA：核糖体RNA（Ribosomal RNA） bp： 碱 基 对 （Base pair） OD：光密度（Optical density） Trizol：总RNA抽提试剂（TRIpure Reagent） PCR：聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction） DNB：DNB纳米球（DNA nanoball） NCBI：美国国家生物技术信息中心（National Center for Biotechnology Information） RefSeq：RNA参考序列库（RNA reference sequences collection） FANSe3 ： 超高精度的高速序列比对算法（ Fast and Accurate mapping algorithm for Next-generation Sequencing, the 3rd generation） 质量控制要求 通用要求 生物样本及相关数据的使用应遵守区域、国家和国际的伦理规范。 样本质量要求应通过完整性和样本浓度确定，达到 GB/T