拉曼光谱技术在植物细胞壁中的应用以及展望演示文稿.pptVIP

相干拉曼散射显微术（CARSSRS）简介 CARS优势：高灵敏度，高空间分辨率，高时间分辨率 可以对脂类等小分子成像，重要的生命物质脂类进行观察。（谢晓亮院士说，因为美国人比较胖，所以……） 可以通过选择振动光谱，对体内特定小分子物质如药物，或者生物大分子如核酸蛋白质进行无需标记的成像，是重要的活体成像手段 可以进行视频速率的活体监测 可以很好的研究植物细胞壁中木质素的分布，有助于理解生物质转换过程中的各种处理与反应的发生机理 SRS优势：比CARS更灵敏，且可以完成定量分析 1999年，谢晓亮实验室采用新的激光控制技术，使CARS显微术走向实用 2009年，谢晓亮实验室开发出SRS显微镜，很大程度上弥补了CARS的不足 本文档共61页；当前第31页；编辑于星期六\6点21分 CARS与SRS技术的创立者——谢晓亮，纵横生命科学世界的华人 美国国家科学院院士，哈佛大学终身教授，Nature杂志编委 本文档共61页；当前第32页；编辑于星期六\6点21分 闵玮，哥伦比亚大学教授。博后期间以第一作者发表有关SRS显微技术 本文档共61页；当前第33页；编辑于星期六\6点21分 CARS tissue image of small adipocytes of the subcutaneous layer from mouse ear tissue. The image was taken at a Raman shift of 2845 cm-1 to address the CH2 stretching frequency. 本文档共61页；当前第34页；编辑于星期六\6点21分 RNAi screening of new fat storage regulatory genes based on in vivo lipid quantification using label-free SRS microscopy. SRS images at 2845 cm-1 for wild-type worm (a), the daf-2 mutant (b), and the transgenic worm intestinally overexpressing the lipase (c). (d) Quantification of fat content by SRS (n = 5 worms) and thin-layer chromatography–gas chromatography. (e) SRS signal increase compared to the control for genes that resulted in a fat content increase of more than 25% when inactivated by RNAi (P 0.0001, n = 5 worms). 本文档共61页；当前第35页；编辑于星期六\6点21分 3 拉曼光谱在植物细胞壁中的应用 细胞壁成分很复杂，是一种纳米复合材料，微纤丝嵌入在不同基体复合物中（纤维素，果胶，木质素），得到的光谱是多种物质光谱的重叠。 植物的形状和机械强度由植物细胞壁决定，而植物细胞壁是由结构组件在复杂组合而成。细胞壁必须能够增长，因此,细胞壁具有灵活性和弹性。 细胞壁的功能特性不仅取决于细胞壁的聚合物组成,还在于聚合物大分子结构和构象,和从几纳米尺度(即规模略高于分子)到几微米高度有序的架构。而利用经典的化学技术来处理细胞壁聚合物会让这些细节丢失。 因此光谱方法发挥了重要作用检查植物细胞壁的原生状态。不仅化学成分本身的利益,还构造和组成与细胞壁层以及不同聚合物的取向和变形的变化。 关于细胞壁的主体结构的研究已经完成,在接下来的重点将次要的植物纤维以及更细小更细节的部分。 本文档共61页；当前第36页；编辑于星期六\6点21分 本文档共61页；当前第37页；编辑于星期六\6点21分 本文档共61页；当前第38页；编辑于星期六\6点21分 3.1微纤丝 存在的技术难点： 如果有合适的角度，拉曼光谱的强度取决于微纤丝之间的角度和激光偏振方向。 改变激光偏振平行(0°)垂直于纤维轴(90°)会导致几乎所有带非常大的拉曼强度的变化，因此,在每一个植物细胞壁拉曼实验中,纤维方向(轴)和激光偏振调整在一个已知或者定义的角度。 可以研究的内容： 可以由于纤维取向的改变造成的强度变化,由此发生不同的纤维素含量 次生细胞壁内的纤维素纤维与纤维轴变化之间的不同的壁层(S1-S2-S3),可以通过拉曼成像可视化观察 值得注意的纤维取向的变化往往对应于纤维素结晶度的变化 本文档共61页；当前第39页；编辑于星期六\6点21分 3