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实时荧光定量pcr仪 荧光测量仪 01 设备简介 03 技术原理 02 优势 目录 医疗应用 基本信息 实时荧光定量pcr仪 ， 由荧光定量系统和计算机组成 ， 用来监测循环过程的荧光 。与实时设备相连的计算机 收集荧光数据 。数据通过开发的实时分析软件以图表的形式显示 。原始数据被绘制成荧光强度相对于循环数的图 表 。原始数据收集后可以开始分析 。实时设备的软件能使收集到的数据进行正常化处理来弥补背景荧光的差异 。 正常化后可以设定域值水平 ， 这就是分析荧光数据的水平。 设备简介 设备简介 实时荧光定量PCR仪+实时荧光定量试剂+通用电脑+自动分析软件 ， 构成PCR-DNA/RNA实时荧光定量检测系统。 优势 优势 样品到达域值水平所经历的循环数称为Ct值（限制点的循环数） 。域值应设定在使指数期的扩增效率为最大， 这样可以获得最准确 ， 可重复性的数据 。如果同时扩增的还有标有相应浓度的标准品 ， 线性回归分析将产生一条 标准曲线 ， 可以用来计算未知样品的浓度。 技术原理 技术原理 所谓real-time Q-PCR技术 ， 是指在PCR反应体系中加入荧光基因 ， 利用荧光信号累积实时监测整个PCR进程 ， 最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法 。在 real-time技术的发展过程中 ， 两个重要的发现起着关键 的作用：（1）在90年代早期 ，TaqDNA多聚酶的5 ′核酸外切酶活性的发现 ， 它能降解特异性荧光记探针 ， 因此使 得间接的检测PCR产物成为可能 。（2） 此后荧光双标记探针的运用使在一密闭的反应管中能实时地监测反应全过 程 。这两个发现的结合以及相应的仪器和试剂的商品化发展导致real-time Q-PCR方法在研究工作中的运用。 实时荧光定量pcr仪PCR反应过程中产生的DNA拷贝数是呈指数方式增加的 ， 随着反应循环数的增加 ， 最终PCR 反应不再以指数方式生成模板 ， 从而进入平台期 。在传统的PCR中 ， 常用凝胶电泳分离并用荧光染色来检测PCR反 应的最终扩增产物 ， 因此用此终点法对PCR产物定量存在不可靠之处 。在real-time Q-PCR中 ，对整个PCR反应扩 增过程进行了实时的监测和连续地分析扩增相关的荧光信号 ， 随着反应时间的进行 ， 监测到的荧光信号的变化可 以绘制成一条曲线 。在PCR反应早期 ，产生荧光的水平不能与背景明显地区别 ， 而后荧光的产生进入指数期、线性 期和最终的平台期 ， 因此可以在PCR反应处于指数期的某一点上来检测PCR产物的量 ， 并且由此来推断模板最初的 含量 。为了便于对所检测样本进行比较 ，在real-time Q-PCR反应的指数期 ， 首先需设定一定荧光信号的域值， 一般这个域值（threshold） 是以PCR反应的前15个循环的荧光信号作为荧光本底信号 （baseline） ， 荧光域值 的缺省设置是3～15个循环的荧光信号的标准偏差的10倍 。如果检测到荧光信号超过域值被认为是真正的信号， 它可用于定义样本的域值循环数（Ct） 。Ct值的含义是： 每个反应管内的荧光信号达到设定的域值时所经历的循 环数。 医疗应用 医疗应用 ⑴病原体检测 目前 ，采用荧光定量PCR检测技术可以对淋球菌、沙眼衣原体、解脲支原体、人类乳头瘤病毒、单纯疱疹病 毒、人类免疫缺陷病毒、肝炎病毒、流感病毒、结核分枝杆菌、EB病毒和巨细胞病毒等病原体进行定量测定 。与 传统的检测方法相比具有灵敏度高、取样少、快速简便等优点。 如： 结核菌基因诊断的意义主要表现在： a.区分TB与其它分枝杆菌； b.检测TB耐药基因； c.提高TB的阳性检出率。 ⑵产前诊断 到目前为止 ， 人们对遗传性物质改变引起的遗传性疾病还无法治疗 ， 只能通过产前监测 ，减少病婴出生 ， 以 防止各类遗传性疾病的发生 ， 如为减少X连锁遗传病患儿的出生 ， 从孕妇的外周血中分离胎儿DNA ， 用实时荧光定 量PCR检测其Y性别决定区基因是一种无创伤性的方法 ， 易为孕妇所接受。 谢谢观看