荧光原位杂交演示文稿.pptVIP

探针标记 为了确定探针是否与相应的基因组DNA杂交，有必要对探针加以标记，以便在结合部位获得可识别的信号。 荧光原位杂交得探针常用荧光素或地高辛进行标记。 探针标记可以采用均匀标记和末端标记的方法。 本文档共38页；当前第23页；编辑于星期一\1点56分 对探针进行标记时，可复制合成一段新探针分子，在复制合成过程渗入标记核苷酸，从而使整个新分子被均匀地标记。其显著的特点是标记不局限一个位点，而是均匀地渗入，探针的信号强。 均匀标记有切口平移法、随机引物法和PCR扩增等方法。 均匀标记 本文档共38页；当前第24页；编辑于星期一\1点56分 切口平移标记法 标记部分 本文档共38页；当前第25页；编辑于星期一\1点56分 切口平移法可对环状或线性双链DNA进行标记。一般对克隆的DNA片段用这种方法标记的效果较好。 该方法使用时应注意： A.只能标记双链DNA 使用探针时要预先变性后再使用，而且标记时DNA片段不太小 B. DNA酶I使用的量要合适 太多会将DNA模板切碎，不能进行标记反应；太少则不能有效地打开缺口，使标记物不能进入缺口 C. 标记时间不能太短 太短时间会造成标记量不足，影响杂交的进行 本文档共38页；当前第26页；编辑于星期一\1点56分 随机引物标记法 本文档共38页；当前第27页；编辑于星期一\1点56分 * swu swu swu swu 荧光原位杂