第六章大肠杆菌基因工程演示文稿.pptVIP

包涵体型异源蛋白的表达 以包涵体形式表达目的蛋白的优缺点 包涵体表达形式的缺点： 以包涵体形式表达的重组蛋白丧失了原有的生物活性，必须通过有效的变性复性操作，才能回收得到具有正确空间构象（因而具有生物活性）的目标蛋白，因此包涵体变复性操作的效率对目标产物的收率至关重要。然而，这也是一个技术难题，尤其当目标蛋白分子中的Cys残基数目较高时，体外复性蛋白质的成功率相当低，一般不超过30% 本文档共85页；当前第31页；编辑于星期六\12点5分 包涵体型异源蛋白的表达 以包涵体形式表达目的蛋白的操作 如果未进行特殊设计（如分泌型表达或融合型表达），外源基因在大肠杆菌中表达的蛋白量占细胞总蛋白量20%以上时，表达产物一般倾向于形成包涵体。因此，以包涵体形式表达目的基因操作的关键就是选择高表达的载体。事实上，这种高表达率也是包涵体法的长处所在 本文档共85页；当前第32页；编辑于星期六\12点5分 包涵体型异源蛋白的表达 包涵体的变性与复性操作 C 共价修饰的蛋白质 蛋白质变性复性的动力学原理： C1 C2 Cn C U I 1 I n N X1 X2 Xn X Ag Ag Ag Ag I 有效变复性过程中的中间状态 X 脱离有效变复性过程而进入集聚的中间状态 N 天然状态的蛋白质 U 变性状态的蛋白质 A 集聚状态的蛋白质 在细菌细胞内，集聚状态和共价修饰的蛋白质