薄层色谱与柱层析精选（48页）.pptxVIP

Co;色谱法是目前最常用的一类分离技术，利用不同结构或不 同性质的物质在不相混溶的二相中分布不同而进行分离。当流 动相流过固定相时，这些物质被流动相带过，以不同速度向前 移动。经过一段时间之后，不同物质移动的距离有较明显的差 异，被分离成一条条的色带，从而可以取下、溶出，获得纯的 组分。 chrome意为“色彩”，graphy源自希腊文，“写”。色谱为 层析的同义语，都是从英语chromatography译来的。;茨维特色谱图（1906）;色谱法的分类;3）根据分离机理分类;薄层色谱法(Thin Layer Chromatography) 最常用的薄层色谱也属于液-固吸附色谱。同柱色 谱不同的是吸附剂被涂布在玻璃板上，形成薄薄的平面涂 层。干燥后在涂层的一端点样，竖直放入一个盛有少量展 开剂的的有盖容器中。展开剂接触到吸附剂涂层，借毛细 作用向上移动。与柱色谱过程相同，经过在吸附剂和展开 剂之间的多次吸附-溶解作用，将混合物中各组分分离成 孤立的样点，实现混合物的分离。;\展开剂;特点: 1. 分离能力强，斑点集中; 2. 灵敏度高； 3. 展开时间短； 4. 试样预处理简单； 5. 上样量大； 6. 仪器简单操作方便。;R＜测量示意图;薄层固定相;薄层点样 以使用的器具不同，点样可分为手动和自动点样。 ?手动点样主要使用的器具有微升毛细管、微量注射 器或配合与之相应的手动点样仪等。;以点样方式的不同可分为接触式点样和喷雾点样两种。 接触式点样：多采用定量毛细管、微量注射器手动点样, 有的仪器也可进行自动接触式点样。 接触式点样应注意： 正确选择溶解样品的溶剂 原点直径一般以3mm为宜 防止点样毛细管损伤薄层表面 尽量避免多次点样 防止点样环形色谱效应;点样环形色谱效应： 在点样的同时，样品在原点呈环状展开，如果样品在溶剂 中的溶解度很大，原点将变成空心环，称为“点样环形色 谱效应” C它会对展开造成不良影响。应选择样品组分溶 解度相对较小的溶剂以避免此现象的产生。;前;展开 选择大小适合的展开容器，将点有样品的薄层 板放入容器内的展开剂中，浸入深度以展开剂液面 距点祥基线5mm为宜，密闭，展开。一般上行展开 8-15cm,高效薄层板上行展开在溶剂前沿 达到预定展距后，取出薄层板，晾干，待检测。 展开方式主要有上行展开、下行展开、双向 展开、水平展开、环形展开等。目前多采用上行展 开。;边缘效应：薄层展开后，位于薄层板边缘的样品斑点 比移值较处于中间的斑点大的现象。边缘效应会使斑点扩 散变形，从而影响样品定性结果的判断。薄层扫描定量时， 斑点的形状直接影响到扫描后的峰高和峰宽，从而影响定 量结果的准确性。 , ______.;预饱和：可在加入展开剂后使展开容器密闭， 放置15-30分钟，待溶剂蒸汽平衡后，迅速放入点有 样品的薄层板，立即密闭，展开。必要时可放置适 当大小的滤纸促使展开缸内蒸汽达到饱和。;常用展开剂 对展开剂的要求 ① 对被测组分有良好的溶解性； ② 有良好的分离效果； ③ 斑点圆整不拖尾； ④ 氏值最好在0.3-0.5，组分较多最好在0.25-0.75； ⑤ 展开剂不能和被测组分发生反应； ⑤沸点适中，粘度较小。;用单一）容剂为展开剂吋，由于溶剂组分简单，分离重现性好，对 于难分离的化合物经常要用二元、三元甚至多元溶剂组成的展开剂。 在混合展开剂中占比例大的主要溶剂起溶解物质和基本分离的作用， 比例较小的溶剂起调整改善分离物质的R/直及对某些物质的选择作用。 一般主要溶剂选用不易形成氢键的溶剂，或极性比分离物质低的溶剂, 否则将使被分离物质的R,值太大或甚至跟随溶剂前缘移动。 在展开剂中加入少量酸，喊可以使某些极性物质斑点集中，提高 分离度，用粘度太大的溶剂时，需要加入一种溶剂以降低展开剂的粘 度、加快展开速度。 环己烷一丙酮■-二乙胺*-水（10:5:2:5）这个系统中，水是极性 大的溶剂，环己烷是极性小的溶剂，后者的加入可以降低分离物质的 Rt值，丙酮起着混合整个系统及降低展开剂粘度的作用，少量二乙胺 的加入控制了展开剂的pH值以使分离后的斑点不致拖尾，分离清晰。;① 碘蒸气在浅黄色背景上，很多有机化合物吸附碘，可逆地产生棕色 到黄色斑点，不少化合物的检测灵敏度可达 ② 10%硫酸乙醇液，喷露后于IO5aC加热i0?［5min，日光或紫外光下 观察。大多数有机物呈有色斑点，如红色，棕色和紫色等，在炭化 以前，不同的化合物将出现一系列颜色的改变，被炭化的化合物常 出现荧光、 ③ 高锰酸钾一硫酸液，结果为粉底本色上产生白色斑点。 ④ 25%高氯酸水液，喷雾后加热至150 °C观察。 ⑤ 10%?20%五氯化锑的四氯化碳液，或三氯化锑的乙醇饱和溶液， 喷雾后，在UX）?120 °C加热，日光下和紫外光下观察，这