细胞与分子生物学08鼠肝dna制备.pdfVIP

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2023-12-04 发布于北京
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细胞与分子生物学08鼠肝dna制备.pdf

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实验原理 • 是的组成成分，遗传的物质基础 • 研究遗传、疾病发生的基础 • 研究的前提：的提取 DNP RNP 以DNP、RNP形式存在。以、形式存在。策略：策略： 1 SDS 1、破细胞SDS破坏细胞膜、破细胞破坏细胞膜 2 2 、去蛋白苯酚（蛋白变性剂）、去蛋白苯酚（蛋白变性剂） 3 RNARNase 3、除RNARNase 、除 • 本实验用SDS、EDTA ，在Tris- HCl存在的条件下，裂解细胞，消化蛋白质，使白解聚并使细胞内存在的酶失活，然后用苯酚—氯仿多次抽提后，用乙醇沉淀得到纯化的。 • 大小为100－150kb 。试剂作用 • 裂解缓冲液：Tris-HCl pH7.8 维持pH恒定，防止变性和水解；EDTA能络合二价金属离子，当Mg2+被络合后，细胞内释放出来的酶的作用被抑制，以避免的降解，同时金属离子络合后，细胞膜的稳定性下降，有利于膜的裂解；SDS有使蛋白质变性的作用，它能破坏膜蛋白的构象，因此使膜裂解，它又能使白中的核酸与蛋白质解离，并且SDS也具有抑制酶的作用。 Phenol、Chloroform 、 Proteinase K and RNase • Phenol ：苯酚，强烈蛋白变性剂，去蛋白。注意盖紧离心管 • Chloroform ：氯仿，蛋白变性剂，能加速有机相与液相分离。并有抑制RNase 的作用。 • Proteinase K ：蛋白酶K ，能水解与结合的白以及细胞质中会降解的酶。可与EDTA、 SDS 合用。 • RNase ：去除RNA 样品准备生物组织： ➢最好新鲜组织，若不能马上提取，应－70℃或液氮 ➢组织匀浆法实验操作（1）： +2.5V冰乙醇； + 20%SDS 25ul ；鼠肝匀浆液 0.1MNaCl EDTA 30ul ；