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纤维素酶活力的测定方法

1原理

纤维素酶是一种复合酶。酶系包括外切B-1.4-葡聚糖酶（ExoB-1.4glucanase,EC3.2.1.9）内切B-1.4葡聚糖酶（Endo6-1.4-glucanase,EC1.2.1.4）和纤维二糖酶。纤维素酶在一定温度和PH条件下，将纤维素酶底物（滤纸或羟甲基纤维素钠）水解，释放出还原糖。在碱性，煮沸条件下，3.5-二硝基水杨酸（DNS试剂）与还原糖发生显色反应，其颜色的深浅与还原糖（与葡萄糖汁）含量成正比。通过在540nm测定吸光度，可得到产生还原糖的量，计算出纤维素酶的FPA酶和CMCA酶活力，以此代表纤维素酶的酶活力。

2操作

A.FPA酶

A.1绘制标准曲线

按表1规定的量，分别吸取葡萄糖标准使用溶液、缓冲溶液和DNS试剂加入各管中，混匀。

表1葡萄糖标准曲线

管号

葡萄糖标准使用溶液缓冲液吸取量

DNS试剂吸取量

ml 浓

度

mg/ml

吸

取量

ml0 0.0

0.00

2.0

3.01

1.0

0.50 1.5

3.02

1.5

0.50 1.5

3.03

2.0 0.50

1.5

3.04

2.5 0.50

1.5

3.05

3.0

0.50

1.5 3.06

3.5

0.50

1.5

3.0

将标准管同时置于沸水浴中，反应10min。取出，迅速冷却全室温。用水定容至25ml，盖塞，混匀