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1EGFR抑制剂持续的增殖信号细胞周期依赖性激酶抑制剂逃避生长抑制端粒酶抑制剂无限复制潜能诱导凋亡的BH3类似物抵抗细胞凋亡VEGF信号通路抑制剂诱导血管生成HGF/c-Met抑制剂组织浸润转移抗CTLA-4单克隆抗体逃避免疫摧毁选择性抗炎症药物促进肿瘤炎症有氧糖酵解抑制剂细胞内能量异常PARP抑制剂基因组不稳定和突变HallmarksofCancer:TheNextGeneration.Cell.2011.CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第1页。

2I、肿瘤细胞的增殖实验II、肿瘤细胞的迁移实验III、肿瘤细胞的侵袭实验CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第2页。

3肿瘤细胞的增殖实验细胞增殖检测通常是检测分裂中的细胞数量或者细胞群体发生的变化。肿瘤的发生和发展过程CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第3页。

4肿瘤细胞的增殖实验方法DNA合成检测代谢活性检测细胞数量检测细胞增殖相关抗原检测ATP浓度检测原理放射性标记的3H-胸腺嘧啶与细胞一同孵育，这样新增殖细胞的DNA中就会掺入放射性标记，经洗脱后可用闪烁计数器检测。在细胞增殖过程中脱氢酶的活性会增加，因此其底物四唑盐或AlamarBlue在代谢活跃的细胞环境中会逐渐减少，形成能够改变培养基颜色的甲臜染料。通过分光光度计和酶标仪来读取含染料培养基的吸光度，从而衡量细胞的代谢活性，检测细胞增殖的情况。直接检测活细胞数量的变化。有些抗原（如Ki-67）只存在于增殖细胞中，而非增殖细胞缺乏这些抗原，因此可以通过特异性的单抗来对细胞增殖进行检测。死亡细胞或即将死亡的细胞几乎不含ATP，在细胞溶解物或提取物中测得的ATP浓度与细胞数之间存在严格的线性关系。利用荧光素酶luciferase及其底物荧光素luciferin的ATP检测以生物发光为基础，如果有ATP存在荧光素酶就会发光，而且其发光强度与ATP浓度成正比。特点最准确可靠耗时长放射性危险灵敏度高操作简便目前细胞增殖应用最为广泛最直接的增殖指标细胞直接计数法操作繁琐费时所需细胞量较多需要组织切片无法进行高通量分析适用于高通量细胞增殖检测和筛选增殖实验各类方法比较CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第4页。

5肿瘤细胞的增殖实验代谢活性检测各类方法比较CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第5页。

6肿瘤细胞的增殖实验CCK-8：实验原理CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第6页。

7肿瘤细胞的增殖实验实验举例：细胞活性检测研究某基因对肿瘤细胞增殖的影响以A450平均值为纵坐标，时间为横坐标绘制生长曲线CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第7页。

8肿瘤细胞的增殖实验实验举例：细胞增殖-毒性检测研究某药物对肿瘤细胞增殖的影响CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第8页。

9肿瘤细胞的增殖实验实验举例：细胞杀伤效靶比10:1的效应细胞孔效靶比20:1的实验孔靶细胞孔效靶比10:1的实验孔效靶比20:1的效应细胞孔杀伤率计算公式为：杀伤率(%)=[1-(A实验孔-A效应细胞孔)/A靶细胞孔]×100%CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第9页。

101当有还原性物质存在时会影响CCK-8的测定，增大OD值。在做加药实验时，如果药物具有还原性，应在含有药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度，如果OD值有增大，则证明药物有影响，应在加CCK-8之前更换培养基，排除药物的影响。肿瘤细胞的增殖实验CCK-8：注意事项2接种细胞数：贴壁细胞每孔至少接种1×103个细胞/100ml培养基；白细胞每孔至少接种2.5×103个细胞/100ml培养基；进行预实验，梯度接种细胞，摸索接种细胞的数量。3CCK-8显色时间：贴壁细胞最易显色，加入CCK-8后30min即可肉眼观察显色程度并上机检测；悬浮细胞稍难显色，加入CCK-8后1-4h肉眼观察，若显色困难，则继续培养直到显色完成；白细胞最难显色，需要较长的CCK-8反应时间或增加细胞数量（~105个细胞/孔）；不同的细胞需摸索加入CCK-8后的培养时间，以OD值在1左右为最佳。CCK-8-划痕-transwell侵袭PPT精选文档全文共26页，当前为第10页。

11恶性肿瘤细胞从原发部位，经淋巴道，血管或体腔等途径，到达其他部位继续生长，称肿瘤转移。肿瘤细胞的迁移和侵袭是肿瘤转移必须具备的能力。肿瘤的转移过程