第三节免疫检测技术的基本原理(共84张精品课件).pptxVIP

;免疫学检测技术的优点;免疫分析技术的应用;凝集试验;试管法半定量试验;2.间接凝集法;3.间接凝集抑制试验;凝集反响;2.沉淀反响;单向琼脂扩散试验;双向琼脂扩散试验;对流免疫电泳;;3.中和反响如抗“O〞试验;免疫标记技术;酶联免疫吸附试验;酶及其底物

酶结合物是酶与抗体或抗原,半抗原在交联剂作用下联结的产物。是ELISA成败的关键试剂，它不仅具有抗体抗原特异的免疫反响，还具有酶促反响，显示出生物放大作用，但不同的酶选用不同的底物，将得到不同的颜色反响.;酶;;戊二醛交联法(一步法〕;戊二醛交联法〔二步法〕;过碘酸盐氧化法;标记免疫物的别离与鉴定;计算标本中待测抗原含量

*复原100ml0.

根据对照管与测定管吸光度值之比，

目的：去除游离酶

过碘酸盐氧化法

449

425

642

对照管由于只加酶标抗原，与固相抗体充分结合，故分解底物显色深；

不直接探测待测物，而探测待测物上的标记信号(标记物的放大效应)

5、王中民,李君文,王新为,等.

概念：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反响。

洗涤并除去未结合的封闭蛋白

概念：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反响。

间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。

废除以往沿用的无机或有机试剂，代之以抗体为结合剂

酶联免疫吸附试验;;〔一〕双抗体夹心法;获得待分析物的未标定抗体;间接法是检测抗体最常用的方法，其原理为利用酶标记的抗抗体以检测已与固相结合的受检抗体，故称为间接法。;酶联免疫吸附试验(ELISA-间接法);包被固相载体:

用抗原包被

固相载体;〔三〕竞争法;用特异性

抗体包被

固相载体;概念：颗粒性抗原(细菌、红细胞等)与相应抗体结合，在一定条件下出现肉眼可见的凝集物，称为凝集反响。

根据颜色反响的程度进行

植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素

免疫荧光技术

对流免疫电泳

例如杀暝松〔FN〕、

3、??析方式设计

01%HAuCl4所需量

标记免疫物的别离与鉴定

3、谌志强,段惠莉,王新为,等.

标记免疫分析三方式与四环节

先将待检抗原与的抗体反响，再参加用抗原吸附的载体颗粒，不出现凝集为阳性结果。

获得待分析物的未标定抗体

概念：用荧光素、酶、同位素等标记抗体或抗原用以测定相应抗原或抗体的技术称为免疫标记技术。

标记免疫分析三方式与四环节;饲料中盐酸克伦特罗的测定

饲料中毒素的测定〔主要包括黄曲霉毒素，简曲霉毒素〕

饲料中有害微生物的快速筛检〔如沙门氏菌〕;河豚毒素;食源性病原菌检测试剂盒;转基因成份的检测：如转基因玉米中中的cry9e蛋白转基因大豆中的CP4EPSPS蛋白质．

肉制品的掺假检测：

以辣根过氧化物酶标记不同动物肌肉和血清球蛋A抗血清检查牛肉、马肉、猪肉、羊肉和驼肉检测14种畜禽熟肉制品，包括牛肉、羊肉、鹿肉和马肉等，在掺假率为1%时即可检出

;荧光抗体技术的原理与方法

;免疫荧光技术;免疫荧光技术——直接法;免疫荧光技术——间接法;免疫荧光技术;荧光显微镜;;免疫金标记技术;一、胶体金制备;胶体金的制备及特性;;胶体金结合物〔Conjugate〕;一、免疫渗滤测定(IFA);?斑点渗漏法;;IFA——结果判断;二、免疫层析测定〔ICA〕;层析法;;斑点金免疫层析试验〔二〕;;ICA---竞争法测抗原;;ICA——间接法测抗体;;IFA与ICA的比较;;1、罗立新,缪珑,潘力,等.快速检测产单核李斯特菌免疫胶体金层析法的研究[J].中国卫生检验杂志,2006,16(2):154-156.

2、赖卫华,熊勇华,陈高明,等.应用胶体金试纸条快速检测赭曲霉毒素A的研究[J].食品科学,2005,26(5):204-207.;;5、王中民,李君文,王新为,等.免疫金渗滤试验检测食品中沙门氏菌的研究[J].微生物学免疫学进展,2001,29(4):45-47.

6、刘永德,汪毅,陈禹雷,免疫金探针快速检测禽流感病毒研究[J].上海交通大学学报:农业科学版,2005,23(3):321-324.;斑点金免疫渗滤试验;免疫印迹法图解;第四节放射性核素标记技术;;常用标记方法;直接法〔氯胺T法〕;间接法〔连接法〕;间接法〔连接法〕;标记免疫物的别离