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色谱联用技术

张玉慧

0942032216

摘要近年来，色谱联用技术的不断发展和完善，在灵敏度和选择性等方面都有了很大的提高，使得对复杂生物样品中药物及其代谢产物的测定变得更加准确，快速和简便，本文就近年来色谱联用技术在体内药物分析中的应用做一简要综述［1］。简述色谱联用技术如色谱一质谱联用、色谱一固相微萃取联用和色谱一色谱联用等技术的基本特点以及在药物及其代谢产物研究、天然药物化学成分分析及生物大分子分析等方面的应用［2］。

关键字色谱联用技术；体内；药物；药物分析；中药

正文

1色谱-质谱联用技术

色谱技术可为质谱分析提供纯化的样品，而质谱则提供准确的结果信息，素朴质谱的联用能够使样品的分离、定性、定量一次完成［3］。

1.1气相色谱--质谱联用法（GC-MS）

气相色谱--质谱联用法（GC-MS）发展最早，技术也最完善°GC-MS检测灵敏度高，但对样品的极性和热稳定性有一定要求，有时需要衍生化才能检测⑷。朱荣华等以地西泮为内标，用GC-MS法测定人血清中氯氮平及其代谢物。其采取程序升温，起始温度为120°C，高于溶剂沸点而低于样品沸点，充分利用热聚焦效应改善峰形，同时避免了溶剂效应所引起的空间谱带展宽的负面影响［5］。Anderson等采用GC-MS法同时测定癌症患者血浆中5-氟尿嘧啶（5-FU）及其主要代谢物a-氟-p丙氨（alpha-fluoro-beta-alanine,FBA）：用Sep-packC18柱处理样品，方法最低检测限小于1ng/mL（5-FU）和5ng/mL（FBA）［6］。

1.2液相色谱--质谱联用法（LC-MS）

液相色谱--质谱联用（LC-MS）是目前最重要的分离分析方法之一，HPLC的高分离性能和MS的高选择性［7］，高灵敏度及丰富的结构信息相结合，已成为体内药物分析研究中强有力的工具。分析前样品预处理简单一般无需衍生化或水解，更适合于体内药物的分离和鉴定。Baumann等运用HPLC-MS法同时测定人血浆中环磷酰胺（CTX）及其4种代谢物，方法最低检测限为30ng/mL。谢智勇等以LC-MS-MS法测定人血浆中地洛他定浓度，并研究地洛他定在中国男性健康人体内的药动学，结果地洛他定的线性范围为0.2?40ng/mL，最低检测限为0.2ng?mL-1［8］，日内及日间相对标准差（RSD）均小于10%，该方法操作简便、快速、灵敏。

2色谱--色谱联用技术

多维色谱技术应用于样品复杂组分的分析，提高了分离能力。多维色谱技术中常用的方法是二维色谱，即色谱色谱联用法［9］。其一般多指2种色谱方法的联用，它将分离机制不同而又相互独立的两支色谱柱以串联方式结合起来，目的是用一种色谱法补充另一种色谱法分离效果上的不足。常见的联用方法有：气相色谱--气相色谱（GC-GC）联用法、高效液相色谱--气相色谱（HPLC-GC）联用法、高效液相色谱--高效液相色谱（HPLC-HPLC）联用法等。

其中HPLC-HPLC联用法亦称柱切换技术（CS），是指用切换阀来改变流动相走向和流动相系统，从而使洗脱液在一特定时间内从预处理柱入到分析柱的在线固相分离技术10］。CS技术具有以下优势：①分辨率和选择性高；②使待测组分密集，灵敏度高;③在一个色谱系统中，实现多个分离目标；④在线衍生化，灵敏度高，重现性好；⑤在线净化样品，使预处理过程自动化［11］。CS技术近年来发展迅速，广泛应用于各种分析领域，尤其在体内药物分析中应用最多。

待测物的极性是应用CS技术是所需考虑的最重要参数。低极性和中等极性的药物宜使用反相色谱法，选用中等极性的氰基柱和二醇键合柱，用水为预处理柱的流动相。极性高的组分用正相柱作预处理柱，待测生物样品需用大体积于水相溶的有机溶剂萃取后进样。

采用CS技术可使衍生化在线完成，不仅提高了分析的自动化程度，而且还有助于得到较好的精密度和重现性。张群艳等建立HPLC柱前衍生化结合柱切换技术测定血浆中卡托普利浓度的方法：血浆中卡托普利与对漠苯甲基发生衍生化反应后，分别加入等体积的丙酮和水，离心后取上清液进样，以HPLCL柱切换进行分离测定，结果其线性范围为20?1000ng/mL,方法回收率大于98%，为卡托普利人体药动学研究和临床血药浓度监测提供了良好的方法0Tagawa等在CS中引入微柱液相色谱技术，同时测定人体血清中胆固醇和胆固醇3-硫酸酯的浓度，采用紫外检测器和电化学检测器，检测限分别为2.5ng/mL和295ng/mL。Yu等用自动柱切换技术直接分离测定人血浆中甲氨蝶吟及其代谢物I相对回收率大于94%,最低检测限为0.2ng/mL和0.3ng/mL［12］。

3高效液相--核磁共振联用技术

近年来，随着NMR仪在灵