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双萤光素酶共表达载体构建及特性研究的开题报告

一、研究背景

双萤光素酶（BRET）是一种能够利用化学和光学信号的双荧光素酶的成对共表达系统。BRET技术广泛应用于研究蛋白质相互作用及其调节。本研究旨在构建能够表达BRET的双萤光素酶共表达载体，并研究其特性。

二、研究目的

1.构建双萤光素酶共表达载体，以实现BRET系统的表达。

2.研究BRET系统的光学特性，包括发光光谱、发光亮度、对底物的响应等。

3.应用BRET技术研究蛋白质相互作用及其调节。

三、研究内容及方法

1.构建双萤光素酶共表达载体：利用分子克隆技术，从BRET系统的两个基本元素——荧光素酶和荧光素基因中，选择适当的启动子和终止子，克隆并连接两个基因，构建出双萤光素酶共表达载体。设计引物，通过PCR检测所构建的载体并进行测序验证。

2.研究BRET系统的光学特性：利用所构建的双萤光素酶共表达载体，鉴别并筛选出合适的宿主细胞；对宿主细胞进行BRET实验，测定发光光谱和发光亮度；利用不同的底物对BRET系统进行检验，研究其对底物的响应情况。

3.应用BRET技术研究蛋白质相互作用及其调节：利用BRET技术研究蛋白质相互作用及其调节。通过转染被测蛋白基因和另一蛋白基因，分别连接BRET系统的不同元件，利用BRET技术检测它们之间的相互作用。

四、研究意义

1.构建适用于BRET技术的载体，为开展相关研究提供了方便和基础。

2.通过研究BRET技术的光学特性，为今后BRET技术的发展提供方向和指导。

3.基于BRET技术研究蛋白质相互作用及其调节，为相关疾病的治疗提供基础和原理。

五、预期成果

1.成功构建双萤光素酶共表达载体，并通过PCR检测和测序验证。

2.研究BRET系统的光学特性，确定适用宿主细胞，测定发光光谱和发光亮度，检测其对底物的响应情况。

3.利用BRET技术研究蛋白质相互作用及其调节，取得初步研究结果。

六、进度安排

2021年9月-11月：构建双萤光素酶共表达载体。

2022年1月-3月：研究BRET系统的光学特性。

2022年5月-7月：应用BRET技术研究蛋白质相互作用及其调节。

2022年9月-11月：撰写论文。

七、参考文献

1.Pfleger,K.D.,Eidne,K.A.(2006).Illuminatinginsightsintoprotein–proteininteractionsusingbioluminescenceresonanceenergytransfer(BRET).Naturemethods,3(3),165-174.

2.Topham,C.M.,Srikumar,T.(2014).Opticaltechniquesforimagingsmallmoleculesandprotein-proteininteractionsinlivingcells.AustralianJournalofChemistry,67(6),859-866.

3.Doan,T.,Bayley,H.(2010).Towardsinglemoleculedetectionofprotein-proteininteractions.Proteomics,10(4),712-729.