薄荷挥发油成分的气相色谱.docxVIP

薄荷MenthahaplocalyxBriq.为唇形科多年生药食两用草本植物，味辛、性凉，具有疏散风热、清利头目、利咽、透疹、疏肝行气之功效，临床主要用于风热感冒、风温初起，以及头痛、目赤等症［1］。薄荷适应性强，全国各地均可栽培，其中以江苏、安徽产质量较好［2］。薄荷用途非常广泛，以其地上部分及提取物为原料的产品涉及医药、食品、化妆品、香料、烟草等。薄荷富含挥发油、黄酮、氨基酸等化学成分，其中挥发油是其主要成分，也是主要活性组分之一。药理研究［3-7］表明，薄荷挥发油具有抗疲劳及改善大鼠学习记忆能力的作用，能够减轻内毒素致炎症模型小鼠的肺部炎性损伤，抑制鸡蛋清引起的大鼠足跖肿胀和二甲苯引起的小鼠耳廓肿胀。另夕卜，薄荷乙醇提取物能够降低四氧嘧啶性高血糖小鼠的空腹血糖，具有抗过氧化损伤的作用［8］。本研究拟采用水蒸气蒸馏法制备薄荷挥发油，采用气相色谱-质谱联用（GC-MS）法分析其主要成分；并以自然衰老小鼠为模型，观察薄荷挥发油的抗衰老作用，以期为其开发利用提供实验依据。1材料与方法1.1动物健康雄性昆明种小鼠150只，SPF级，体质量（42±2）9，购自江苏大学实验动物中心，动物质量合格证号：201508865，动物生产许可证号：SCXK（苏）2013-0011，实验室饲养至18月龄供试验用。另取健康成年小鼠30只作为正常对照，体质量（20±2）g，动物质量合格证号：201609869。1.2药品及主要试剂薄荷，采自安徽科技学院中药科技园，经安徽科技学院中药学教研室刘汉珍教授鉴定为唇形科植物薄荷MenthahaplocalyxBriq.；维生素E软胶囊，安徽大东方药业有限公司，批号中华墨汁，上海精细文化用品有限公司，批号：120301，临用时用生理盐水稀释5倍;免疫球蛋白G（IgG）试剂盒（批号s免疫球蛋白M（IgM）试剂盒（批号s超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒（批号.谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒

（批号、丙二醛（MDA）试剂盒（批号，均购自南京建成生物工程研究所。1.3仪器7890B-5975C型气相色谱-质谱联用仪，美国安捷伦公司；FA2104B型电子分析夭平，上海越平科学仪器有限公司；TU-1810型紫外可见分光光度计，北京普析通用仪器有限责任公司；TG16-WS型台式高速离心机，长沙湘仪离心机仪器有限公司；HH-8型数显恒温水浴锅，常州国华电器有限公司；MultiskanFC型酶标仪，赛默飞世尔（上海）仪器有限公司。1.4薄荷挥发油提取及成分分析1.4.1薄荷挥发油提取采用水蒸气蒸馏法提取薄荷挥发油。取薄荷适量，加水（m/V=1：10），加入沸石防止暴沸，蒸馏6h至挥发油量不再显著增加，取上层淡黄色液体，加入少量无水Na2SO4充分干燥。测定时采用无水MgSO4脱水，以色谱纯甲醇溶解后得薄荷挥发油检测样品。1.4.2薄荷挥发油成分分析气相色谱条件：色谱柱为HP-5MS（5%PhenylMethylSilox，30m乂250|jm乂0.25顷）；进样量为1.0W，分流比为10：1，载气为高纯氨气，流速为1.0mL-min-1，进样口温度为250C。；程序升温：初始温度60C。，以5C^min-1速率升温至220C。，保留10min。质谱条件：离子源温度230C。，四级杆温度150C。；接口温度250C。，电离方式为日源，电子能量70eV，离子扫描范围45~400m/z，溶剂延迟时间4min。1.5薄荷挥发油抗衰老药理作用1.5.1分组及给药取老年小鼠50只

（18月龄），随机分为模型组、维生素E组（200mg-kg-1）及薄荷挥发油高、中、低剂量组（0.004、0.002.0.001mL-kg-1），每组10只，另取10只健康成年小鼠作为正常对照组。各给药组小鼠在灌胃时采用葵花籽油稀释后给药，以等容积不同浓度给药，灌胃容积为20mL-kg-1（每周称体质量1次，根据体质量调整给药量），每日1次，连续给药4周，正常对照组和模型组灌胃等体积的葵花籽油。因1批实验无法完成全部指标检测，故本实验共取老年小鼠150只，健康成年小鼠30只，重复3次动物实验以完成全部指标检测。1.5.2炭粒廓清指数及吞噬指数测定末次给药结束24h后，将小鼠以电子天平称体质量，然后分别自尾静脉注射中华墨汁（10mL-kg-1），分别于注射后2、10min眼眶后静脉丛采血20W；将血液立即滴入2mL0.1%Na2CO3溶液中，采用紫外可见分光光