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⑵缩合酮酰基-ACP合成酶接受乙酰-ACP的乙酰基,释放HS-ACP。酮酰基-ACP合成酶催化乙酰基转移到丙二酸单酰-ACP上,形成乙酰乙酰-ACP,并释放一分子CO2。⑶还原在酮酰基-ACP还原酶催化下,乙酰乙酰-ACP中的b-酮基被NADPH+H+还原为醇,形成D-b-羟丁酰-ACP。本文档共71页;当前第30页;编辑于星期六\8点55分⑷脱水在b-羟酰基-ACP脱水酶的催化下,D-b-羟丁酰-ACP脱水,生成带有双键的反式丁烯酰-ACP。⑸还原烯酰基-ACP还原酶催化反式丁烯酰-ACP还原为丁酰-ACP,NADPH为辅酶。本文档共71页;当前第31页;编辑于星期六\8点55分本文档共71页;当前第32页;编辑于星期六\8点55分本文档共71页;当前第33页;编辑于星期六\8点55分4、脂肪酸β-氧化和合成的主要区别从上述脂肪酸合成途径可以看出,脂肪酸合成和降解是通过完全不同的两条途径进行的。下表归纳了软脂酸β-氧化和合成的主要区别。本文档共71页;当前第34页;编辑于星期六\8点55分为增加脂肪酸生物合成,可从以下几方面考虑:⑴选育乙酰-CoA羧化酶活力强的菌株,设法解除终产物(脂酰CoA及脂肪酸)的反馈抑制。选育抗代谢产物结构类似物突变株(抗脂肪酸结构类似物),即抗反馈调节突变株。选育营养缺陷型的回复突变株或选育条件突变株,解除微生物细胞正常的自我调节,使脂肪酸得以积累。三、脂肪酸生物合成的代谢控制育种本文档共71页;当前第35页;编辑于星期六\8点55分⑵选育易生成并大量积累柠檬酸的菌株或有利于柠檬酸合成而不利于柠檬酸降解的突变株。⑶选育丧失或只具有微弱柠檬酸脱氢酶活力的突变株。如异柠檬酸脱氢酶的渗漏突变株等。本文档共71页;当前第36页;编辑于星期六\8点55分第二节多不饱和脂肪酸发酵
的代谢控制育种多不饱和脂肪酸(polyunsaturatedfattyacids,PUFAs)是指含2个或2个以上双键且碳原子数为16~22的直链脂肪酸,包括γ-亚麻酸、花生四烯酸、二十碳五烯酸(EPA)、二十二碳六烯酸(DHA)等。由于多不饱和脂肪酸可广泛用于医药、食品、化妆品、饲料等领域,因此世界各国开展了多饱和脂肪酸的微生物育种、发酵提取工艺以及发酵动力学等方面的研究。本文档共71页;当前第37页;编辑于星期六\8点55分多不饱和脂肪酸的自然来源主要是动植物,但含量最丰富的是微生物,特别是藻类、真菌、细菌等,且主要以储存油和膜脂的形式存在,尤其是ω-3多不饱和脂肪酸。藻类、真菌、细菌拥有重新合成多种ω-3多不饱和脂肪酸所需的系列脱饱和酶和连接酶,它们是自然界中这些化合物的初始生产者,而高等植物和动物则很少含有ω-3多不饱和脂肪酸。本文档共71页;当前第38页;编辑于星期六\8点55分目前商业上ω-3多不饱和脂肪酸主要是从深海鱼油中提取,工艺复杂、成本高、稳定性差,还受气候条件和资源的限制。微生物具有适应性强、生长繁殖迅速、生长周期短、易培养、不受原料产地限制等特点,所以利用微生物生产多不饱和脂肪酸是一条重要途径。目前,日本、英国等国家已先后问世了γ-亚麻酸、双高γ-亚麻酸、花生四烯酸等发酵产品,而EPA、DHA等仍处于研究阶段。本文档共71页;当前第39页;编辑于星期六\8点55分一、γ-亚麻酸发酵的代谢控制育种1919年德国的药理学家Hei-duschKa博士从月见草中发现与亚油酸相似的高级多不饱和脂肪酸,被命名为γ-亚麻酸。γ-亚麻酸是人体内所必需的必需脂肪酸。如果人体一旦缺乏了必需脂肪酸,心脑血管、生殖、内分泌等系统就会出现异常,发生紊乱,从而引起高血脂,高血压,血栓病、动脉粥样硬化、糖尿病、加速衰老等一系列疾病,γ-亚麻酸特别对脑组织的生长发育至关重要。本文档共71页;当前第40页;编辑于星期六\8点55分本文档共71页;当前第41页;编辑于星期六\8点55分当γ-亚麻酸的生物活性含量达到15%以上,就能起到显著的药理治疗作用。由此可见,γ-亚麻酸是人类的生命之宝。从植物中提取γ-亚麻酸受到诸多因素的限制,植物生长周期长,种子采集较难,油含量不稳定,难以满足人们日益增长的需求。1948年,Bernhard和Alberch首次从布拉克须霉的菌体脂肪中鉴定出含有γ-亚麻酸,揭开了微生物发酵γ-亚麻酸的序幕,大量的研究随之展开。本文档共71页;当前第42页;编辑于星期六\8点55分γ-亚麻酸(GLA)为全顺式6,9,12-十八碳三烯酸,非共轭立体构型,分子式为C18H30O2,由于其高度的不饱和性在空气中不稳定,在碱性条件下易发生双键位置及构型的异
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