抗肿瘤药物筛选课件.pptVIP

步骤：（1）制备单细胞悬液；(2)对细胞进行计数，计数后接种于96孔板，一般每孔细胞数为5000个（可先做细胞倍增试验确定每孔中最佳细胞数）；（3）将培养板放入CO2培养箱，过夜培养；（4）24h后更换培养基，并在每孔细胞中加入不同浓度药物，继续培养；（5）24或48h以后，加入MTT溶液，再培养3-6h,停止培养，弃取培养基,加入DMSO，每孔150ul，轻微震荡混匀；（6）把96孔板放入酶标仪中，490nm测定吸光度。3.抗代谢法

抗代谢物在无机氮源的合成培养基中显示抗菌作用，而在普通有机氮源的营养培养基中无抗菌作用（因为有机氮源可将具有抗菌作用的物质代谢），利用此特点，选择无机氮源试验有抗菌作用的物质，作为抗代谢的初筛方法。

常用宿主动物：裸小鼠（“活的试管”）特点：先天无毛，无胸腺，T淋巴细胞功能完全缺失，对异种移植不产生排斥反应。缺点：费用高，饲养条件高，不宜大量繁殖。一般不用于初筛。应用：观察药物对癌细胞逆转作用，抑制增殖及诱导凋亡作用。C57BL/6小鼠特点：黑毛，体型小，性情温顺，易饲养，药敏性好，为研究Lewis肺癌首选。应用：药物体内初筛。模型建立方法实体瘤建立及评价：1.小块瘤体接种法2.肿瘤细胞悬液接种法3.培养细胞移植法疗效评价：肿瘤抑制率＝（对照组瘤重－给药组瘤重）/