hplc-elsd法测定杷杷叶总三酸固体分散体片中6种三酸的含量.docxVIP

hplc-elsd法测定杷杷叶总三酸固体分散体片中6种三酸的含量

枇杷总三种三醇酸的有效部位是研究团队在早期提取枇杷总三醇酸的有效部位。它主要含有六种三醇酸：紫薇酸、指定物质酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩酸和熊果酸。总三醇酸含量为60%70%，具有较强的降血效果。由于枇杷叶中三萜酸水溶性差,影响在胃肠道中的溶出和吸收,生物利用度低,严重制约了其临床应用,课题组将枇杷叶总三萜酸有效部位制成了固体分散体,溶解度、溶出度和生物利用度均得到了较大的提高,为将该有效部位开发成中药五类新药奠定了基础。

枇杷叶总三萜酸固体分散体片系按照中药新药的技术要求,将枇杷叶总三萜酸固体分散体加上适宜的稀释剂、崩解剂、润滑剂压制而成的片剂,该分散体片较普通片体外溶出度有显著提高。本实验旨在建立枇杷叶总三萜酸固体分散体片中6种三萜酸含量测定方法,为控制该制剂的质量提供实验依据。

1仪器、试剂和试药

Waters高效液相色谱仪(Alliance2695四元泵及自动进样系统)、AlltechELSD2000ES检测器、Empower色谱工作站;Mettler万分之一及十万分之一电子天平(瑞士);Milli-Q型纯水器(美国Millipore公司);KQ-250E型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。

蔷薇酸、委陵菜酸、科罗索酸、马斯里酸对照品(由江苏省中国科学院植物研究所从枇杷叶中分离制得,经面积归一化法计算纯度均大于98%),齐墩果酸、熊果酸对照品(中国药品生物制品检定所,批号分别为110709-200505,110742-200518)。甲醇、乙腈为色谱纯,水为超纯水,其余试剂均为分析纯。3批枇杷叶总三萜酸固体分散体片为本研究院制剂室制备的中试产品,批号分别为121130、121201、121202。

2方法和结果

2.1样品含量测定,样品处理及仪器运行

UltimateXBC18色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相乙腈(A)-甲醇(B)-0.5%醋酸铵(C),梯度洗脱,0~30min,5%~10%A,55%B,40%~35%C;30~40min,10%~28%A,55%B,35%~17%C;40~60min,28%~32%A,55%B,17%~13%C;60~65min,32%~5%A,55%B,13%~40%C;65~80min,5%A,55%B,40%C;流速:1.0mL·min-1;柱温35℃;蒸发光散射检测器,漂移管温度为100℃,载气流速为2.5L·min-1;进样量10μL,以外标两点对数方程计算样品的含量。在此色谱条件下,6个三萜酸基本达到基线分离,分离度大于1.5。对照品和样品色谱图见图1。

2.2对照品储备液制备

取蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸对照品适量,精密称定,加甲醇溶解分别制成质量浓度分别0.2916、0.1832、0.1676、0.2663、0.1285、0.3009mg·mL-1的混合对照品溶液,作为对照品储备液。

2.3滤过方式制备

取片剂3片,乳钵碾细,取粉末约80mg,精密称定,置10mL量瓶中,加甲醇超声20min,取出,冷至室温,甲醇定容至刻度,摇匀,0.45μm微孔滤膜滤过,取续滤液,即得。

2.4回归方程系数

精密吸取对照品储备溶液2、4、8、12、16、20μL,注入液相色谱仪,测定其峰面积。以进样量(μg)常用对数为横坐标,峰面积常用对数为纵坐标,求得蔷薇酸回归方程为:Y=1.57X+5.58,r=0.9993;委陵菜酸回归方程为:Y=1.70X+5.45,r=0.9999;马斯里酸回归方程为:Y=1.73X+5.98,r=0.9995;科罗索酸回归方程为:Y=1.71X+5.96,r=0.9993;齐墩果酸回归方程为:Y=1.77X+5.82,r=0.9998;熊果酸回归方程为:Y=1.75X+5.83,r=0.9994。线性范围分别为0.583~5.832,0.366~3.664,0.335~3.352,0.533~5.326,0.257~2.570,0.602~6.018μg。

2.5仪器精密度试验

取“2.2”项下混合对照品溶液,按“2.1”项下色谱条件连续进样6次,计算蔷薇酸、委陵菜酸、马斯里酸、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸的峰面积RSD分别为2.1%,3.0%,1.0%,0.9%,1.4%,0.9%,表明仪器精密度良好。

2.6峰面积及含量测定

精密称取同一片剂粉末6份,按“2.3”项下方