膜片钳技术的基本原理.doc

膜片钳技术的根本原理：

膜片钳技术是用尖端直径1~2μm的玻璃微电极吸管与经蛋白酶处理干净的细胞膜接触，通过20~30cmH2O的负压吸引造成电极尖端与细胞膜形成高阻封接〔10~100GΩ〕，使电极尖端下的小块膜片与膜的其它局部在电学上绝缘，并在此根底上固定膜片电位，监测几个μm2膜片上1~3个离子通道活动的方法。

高阻封接的形成：高阻封接形成与否是记录细胞离子通道电流能否成功的前提，是进行膜片钳实验的关键一步。微电极尖端与细胞膜形成封接的过程，可以采用软件或刺激器发出一个脉冲电压作用于微电极，造成膜两侧电位差发生变化，产生电极电流，再通过示波器或显示屏，观察电极电流幅度的变化来确定封接程度。在电极未入溶液之前，在显示器或示波器上可见一直线。当电极入液后，软件或刺激器发出的电脉冲经记录微电极、浴液及参考电极形成回路，1mV的封接电压流径5MΩ的电极阻抗，则会产生0.2nA的电流浮动，随着微电极尖端接近、接触细胞膜，电极电阻则进一步增加，而电流幅度则随之减小，当在显示器或示波器上看到电流方波变为直线时，则形成低阻封接〔50MΩ〕，然后经微电极给予负压〔-10~-30cmH2O〕，即可形成高阻封接。再将电脉冲调为10mV，调节快、慢电容电流补偿，消除电容电流，就可进行细胞贴附式膜片钳实验，如果在此根底上再次给予负压或电脉冲，使微电极尖端下膜片破裂，则形成全细胞式。

进行高阻封接时，需注意的是

进行高阻封接时，需注意的是：

①在微电极未入液之前常施以正压，使电极内有液体从电极尖端流出，防止浴液外表灰尘或溶液中粒子附着于电极尖端，影响高阻封接。

②如果微电极尖端与细胞膜接触后，仍不能形成高阻封接，则电极即不能再用，需重新换一根微电极继续封接。

③电极尖端与细胞膜接触，稍加负压后电流波形变得平坦，此时，如使电极超极化，则有助于加速形成高阻封接。

④电极入液后封接的成功率与入浴液后的时间呈反比，电极内液中的肽类或蛋白质成分也会有碍于封接形成。(入浴时间愈短，封接愈快)