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小麦矮腥黑穗病菌检疫鉴定方法

1范围

本标准规定了进境植物检疫中小麦矮化腥黑穗病菌的检疫和鉴定方法。

本标准适用于进口小麦、大麦、黑麦中的小麦矮化腥黑穗病菌的检疫和鉴定。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文

件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适

用于本文件。

GB/18085-2000植物检疫小麦矮化腥黑穗病菌检疫鉴定方法

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1样品sample

3.1.1原始样品originalsample

在现场个点扦取的样品。每份原始样品的质量应不少于50g。

3.1.2复合样品compositesample

未经充分混匀的原始样品的总和。每份复合样品的质量应不少于1500g。

3.1.3平均样品averagesample

复合样品经充分混合均匀后的样品。

3.1.4试验样品testsample

从平均样品中称取的、用于洗涤离心的样品。每份试验样品的质量为50g。

3.1.5保存样品keepsample

取走试验样品后用来保存以备复检和仲裁的剩余平均样品。保存样品的质量应不少于1000g。

3.1.6网脊高度值reticulumheight

冬孢子外孢壁的垂直高度值，在光学显微镜下表现为冬孢子外胞壁的刺状或齿状突起的垂直高度

值。

3.1.7临界网脊高度指数值thresholdofreticulumheight

1

用来确定单个冬孢子属性的网脊高度值，其数值为0.95μm。

4原理

小麦矮化腥黑穗病菌是危害麦类作物的一种担子菌，属担子菌亚门(Basidiomycotina)，冬孢菌纲

(Teliomycetes)，黑粉菌目(Ustilaginales)，腥黑粉菌科(Tilletiaceae)，腥黑粉菌属(Tilletia)。

病原菌在麦类作物苗期形成系统侵染。被侵染作物结实时，籽粒被病菌的繁殖体-冬孢子侵占，成为菌

瘿。该病原菌的冬孢子形态学特征、自发荧光显微学特征和萌发生理学特征与其他腥黑粉病菌不同，

是鉴定该病原菌的依据。

4.1冬孢子形态特征

4.1.1冬孢子

小麦矮腥黑穗病菌的冬孢子星球形、椭圆形或不规则形，具网状饰纹和无色到淡色的胶质鞘，

直径(含胶质鞘)为16.80μm~32.19μm，通常为18μm~24μm；冬孢子萌发适宜温度为2℃-8℃，

萌发时形成先菌丝(担子)，在其顶端产生初生小孢子(担孢子)，初生小孢子经“H”形交配后产生新月

形次生小孢子。

4.1.2网脊高度值

该特征是小麦矮腥黑穗病菌和其近似种—小麦网腥黑穗病菌(TilletiacariesTul.)，冬孢子最重要的

区别特征，前者的网脊高度值(平均值士标准差)为1.43μm士0.14μm，后者为0.53μm士0.19μm。

4.1.3临界网脊高度指数值

当某个冬孢子的网脊高度值大于0.95μm时，视为小麦矮腥黑穗病菌冬孢子，小于或等于0.95μm

时，视为小麦网腥黑穗病菌冬孢子。

4.2冬孢子自发荧光显微学特征

在激发滤光片485nm、屏障滤光片520nm的激发下，小麦矮腥黑穗病菌冬孢子在3min内可产生自

发荧光，其近似种小麦网腥黑稿病菌则不具备该能力。

4.3冬孢子萌发

小麦矮化腥黑穗病菌冬孢子在5℃萌发、17℃不能萌发，而小麦网腥黑穗病菌冬孢子在5℃和17℃

均可萌发。

5仪器设备

5.1万能显微镜:具落射汞灯装置、摄像转换器及监视器。

5.2扫描电子显微镜。

5.3激光共聚焦显微镜。

5.4滤光片组:450~490nm激发，520nm屏障。

5.5目镜和镜台测微尺。

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5.6往复式震荡器。

5.7低速离心机。

5.8干热灭菌器。

5.9高压灭菌器。

5.10普通天平:感量1/100。

5.11超净工作台。

5.12生物培养箱: