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茶浸提液抗真菌活性及其义齿清洁应用初探

目的:本课题拟筛选具有抗真菌活性的茶浸提液,测量茶浸提液中儿茶素类的含量,验证其抗真菌活性与儿茶素类含量的关联性,并进行茶浸提液对附着在聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)表面的白色念珠菌膜抑制效果研究,从而探究茶浸提液成为抗真菌药物以及应用于义齿清洁的可能性以提供临床指导。方法:(1)选用市售安吉白茶(AG)、铁观音(TM)、大红袍(HM)作为实验对象,使用琼脂稀释法,制作不同浓度的茶浸提液平板(n=10):浓度分别为1.25,2.50,5.00,10.00,20.00mg/mL。

以不含茶浸提液平板作为空白对照组。将5μl含10~4cfu/mL白色念珠菌点种于各平板上,通过菌落计数观察实验抑真菌结果。

采用单因素方差分析,检验水准为α=0.05。两两比较采用最小显著差数法(LSD法);(2)采用高效液相色谱法测安吉白茶(AG)、铁观音(TM)、大红袍(HM)茶浸提液中儿茶素含量,进而用Pearson相关分析进行儿茶素含量与茶浸提液抗真菌活性关联性分析。

色谱柱为ZORBAXSB-C18柱(5.0μm,4.6mm×150.0mm),流动相为1%乙酸-甲醇;流量:1.0mL/min;检测波长:280nm;柱温为30℃。(3)将同样规格含白色念珠菌膜的PMMA试件(10.0mm×20.0mm×2.5mm)随机分成四组,分别浸泡在10.0mg/mL安吉白茶浸提液,2.5mg/mL大红袍浸提液、0.5%次氯酸钠溶液(阳性对照组)和蒸馏水(阴性对照组)中10min,将处理后的附着在试件上白色念珠菌培养后,用菌落计数法比较不同处理方法对白色念珠菌膜的清除率。

采用单因素方差分析,检验水准为α=0.05。两两比较采用最小显著差数法(LSD法)。

结果:(1)与空白组相比,10.0mg/mL安吉白茶浸提液(P=0.025),2.5mg/mL大红袍浸提液(P=0.046)菌落计数结果差异有统计学意义,其余茶浸提液差异无统计学意义(Pgt;0.05)。(2)在上述色谱条件下,4个待测成分在测定范围内线性关系良好(r≧0.9991),平均加样回收率为97.75%到100.39%之间,RSD均小于5.00%(n=3)。

安吉白茶是三种茶叶中四种儿茶素类成分含量最高;大红袍中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)、表儿茶素(EC)、表儿茶素没食子酸酯(ECG)含量高于铁观音。铁观音中表没食子儿茶素(EGC)含量高于大红袍。

根据Pearson相关分析结果显示,四种儿茶素的含量与茶浸提液抗真菌作用无明显相关:EGC(r=-0.126,P=0.656);EGCG(r=0.139,P=0.621);EC(r=0.197,P=0.482);ECG(r=0.268,P=0.334)。(3)与阴性对照组无菌水相比,10.0mg/mL安吉白茶浸提液(P=0.979),2.5mg/mL大红袍浸提液(P=0.652)的菌落计数结果差异没有统计学意义。

阳性对照组0.5%次氯酸钠溶液组平板无菌落生长。结论:10.0mg/mL安吉白茶浸提液与2.5mg/mL大红袍浸提液抑制白色念珠菌有效,然而,未发现安吉白茶浸提液与大红袍浸提液对PMMA表面白色念珠菌膜有清除效果。

未发现茶浸提液的抗真菌活性与儿茶素类成分含量大小相关。