肥胖性高血压大鼠肾脏损伤的生物学特征及刺蒺藜干预的机制研究.docVIP

肥胖性高血压大鼠肾脏损伤的生物学特征及刺蒺藜干预的机制研究

目的:本课题拟通过刺蒺藜超微粉对肥胖性高血压大鼠肾脏影响的实验研究,应用现代分子生物学技术如免疫组化,PCR,蛋白电泳等,探索其在降血压、利尿以及保护肾脏的作用机制及靶点,观察其在瘦素介导的JAK2/STAT3的通路,RAAS通路以及AVP/PKA/AQP2通路上的作用机制。为肥胖性高血压的中医治疗提供新的思路与实验数据支撑。

方法:1.肥胖性高血压大鼠的模型建立与肾脏损伤的生物学特征:70只wistar大鼠采用高脂饲料饲养25周的方法造模,另外以10只wistar大鼠给予普通饲料饲养作为对照组。25周后,筛选高脂饲料组中体重、血压均超过(≥)对照组平均值25%的32只大鼠,作为肥胖性高血压大鼠。

选取8只大鼠,作为模型组纳入实验一。定期记录两组大鼠体重、血压;实验末,检测血脂及血清中血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、瘦素(Lep)、β2微球蛋白(β2-MG)水平,观察肾脏、脂肪、主动脉等靶器官形态,免疫组化法肾脏TGF-β1的表达。

2.刺蒺藜改善肥胖性高血压的药效学研究:24只肥胖性高血压大鼠随机分为替米沙坦组(8只,TEL组,3.4mg?kg-1?d-1),刺蒺藜组(8只,TT组,17.2mg?kg-1?d-1),模型组(8只,MG组,生理盐水2ml?d-1),与对照组(10只,NG组,生理盐水2ml?d-1),共灌胃12周,定期记录检测大鼠血压、体重。12周后,大鼠麻醉后,取血、肾脏、主动脉及内脏脂肪组织。

HE染色观察各组大鼠肾脏、脂肪组织及主动脉组织形态。3.刺蒺藜对肥胖性高血压大鼠的影响及对肾脏保护机制研究:接实验二,各组大鼠灌胃12周末,取血、肾脏。

检测大鼠血清中Lep、AngⅡ、β2-MG和血管加压素(AVP)含量。免疫组织化学染色法观察大鼠肾脏瘦素受体(LepR)及血管紧张素Ⅱ1型受体(AT1)的分布。

RT-PCR检测大鼠肾脏JAK2、STAT3、LepR、AT1、AT2受体及AQP2的mRNA表达改变。Westernblot法检测大鼠肾脏JAK2、STAT3、PKA的蛋白表达含量。

结果:1.肥胖性高血压大鼠的模型建立与肾脏损伤的生物学特征:经高脂饲料饲养25周后,与对照组相比,模型组体重、血压显著升高(Plt;0.05),TC、LDL-C明显升高(Plt;0.05),TG、HDL-C无明显变化(Pgt;0.05)。模型组的AngⅡ、Lep和β2-MG显著升高(Plt;0.05)。

模型组大鼠脂肪细胞体积明显增大,主动脉重塑,表现为内皮细胞排列紊乱,中层平滑肌细胞层增加,肾脏肾小球缺血变性,肾脏TGF-β1蛋白表达升高,肾脏损伤。2..刺蒺藜改善肥胖性高血压的药效学研究:经药物干预12周后,各组肥胖性高血压大鼠的血压体重均有不同程度的下降,其中,刺蒺藜组大鼠体重、血压显著下降(Plt;0.05)。

TG、TC及LDL-C下降(Plt;0.05)。HE染色观察刺蒺藜组的脂肪细胞减小,高血压主动脉重塑程度显著改善,肾脏肾小球缺血变性改善。

提示刺蒺藜可以改善肥胖性高血压大鼠的症状,减轻肾脏等靶器官损伤。3.刺蒺藜对肥胖性高血压大鼠的影响及对肾脏保护机制研究:经药物干预12周后,各组肥胖性高血压大鼠血清循环AngⅡ、Lep、β2-MG和AVP水平显著下降(Plt;0.05),免疫组化显示,与模型组比较,刺蒺藜组肾脏AT1受体、LepR及TGF-β1蛋白分布密度显著减少(Plt;0.05)。

RT-PCR显示,与模型组比较,刺蒺藜组肾脏的PKA、JAK2、STAT3、AQP2、AT1受体的mRNA表达量显著下降(Plt;0.05),AT1/AT2受体mRNA比值下降(Plt;0.05)。Western-bloting显示,与模型组比较,刺蒺藜组肾脏JAK2、STAT3、PKA的蛋白表达量显著下降(Plt;0.05)。

提示刺蒺藜可以通过肾脏JAK2/STAT3通路降低肾脏瘦素作用,通过降低肾脏RAS及AVP/PKA/AQP2通路降低肾脏的水钠潴留的作用,从而发挥刺蒺藜降压减肥,保护肾脏的功效。结论:(1)刺蒺藜可以降低肥胖性高血压大鼠的体重及血压,降低血脂水平,从而实现治疗肥胖性高血压的药效。

(2)刺蒺藜具有抑制JAK2/STAT3、RAAS等通路表达作用,说明刺蒺藜可以通过降低JAK2/STAT3的通路的活性而达到减重及降压的功效;(3)刺蒺藜可以通过RAAS通路和AVP/PKA/AQP2的途径减轻肥胖性高血压水钠潴留的作用。