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基于皮肤模型化妆品舒缓功效试验方法

1范围

本文件规定了一种化妆品舒缓功效测试体外重组表皮模型IL-1α含量测定的范围、规范性引用文件、

术语和定义、技术原理、试验条件、材料与试剂、仪器设备、试验步骤、试验数据处理、结果判定、以

及试验报告的要求。

本文件可作为化妆品舒缓功效测试替代方法之一，也可结合其他方法对化妆品舒缓功效进行评价。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅改日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489-2008实验室生物安全通用要求

SN/T3899—2014化妆品体外替代试验良好细胞培养和样品制备规范

SNT3898-2014化妆品体外替代试验方法验证规程

《化妆品安全技术规范》

《化妆品功效宣称评价规范》

《化妆品分类规则和分类目录》

3术语和定义

下列术语和定义适用本标准。

3.1

阴性工作液（Negativeworkingfluid）

在试验过程中选择SLS（月桂醇硫酸酯钠，sodiumlaurylsulfate）作为刺激体外重组表皮模型的刺

激物。

3.2

阳性工作液（Positiveworkingfluid）

在试验过程中选择具有显著舒缓功效的样品作为阳性参考，将阳性标准品地塞米松溶于EpiGrowth

培养液中，配置成地塞米松阳性工作液。

3.3

样品工作液（Sampleworkingfluid）

将一定浓度的待测样品溶于培养基中形成样品工作液。

3.4

1

ELISA检测（Enzymelinkedimmunosorbentassay）

酶联免疫吸附试验，是当前应用最为广泛的一项定性/定量检测抗体(抗原)的免疫酶技术。

3.5

体外重组表皮模型（Reconstructedhumanepidermismodel）

采用人原代表皮角质形成细胞，通过组织工程技术在体外重组的皮肤组织，具有与正常皮肤高度相

似的复层化结构、生理及代谢功能。

4技术原理

使用SLS刺激重组表皮模型模拟皮肤刺激性状态：刺激物SLS渗进活细胞层，一方面与细胞表面的

受体如胞内感应受体NLR等发生相互作用，介导炎症因子的产生；另一方面诱导角质层中储存的IL-1α

释放，释放的IL-1α进一步激活炎症相关的信号通路如核因子κB（NF-κB），介导表达更多的炎症因子，

从而使得炎症反应级联放大，使皮肤发生刺激性反应。通过ELISA法检测IL-1α蛋白含量来评价受试物舒

缓功效。

5试验条件

无菌室的等级达到十万级，温度控制在20～24℃，湿度控制在50%～70%，防震动，防电磁干扰。

6材料和试剂

6.1材料

6.1.1重组表皮模型：选用角质形成细胞构建的重组皮肤模型

注：其他角质形成细胞构建的重组皮肤模型也可用于本试验，但应证明其等同性。

6.2试剂

6.2.1体外重组表皮模型培养液（EpiGrowth培养液）。

6.2.2SLS粉末：纯度应达到分析纯级别。

6.2.3磷酸盐缓冲液（PBS）：0.01M的磷酸盐缓冲液（含氯化钾），pH=7.4。

6.2.4二甲基亚砜（Dimethylsulfoxide,DMSO）：CAS号：67-68-5；单位：毫升。

6.2.5地塞米松粉末:纯度应达到分析纯级别。

6.2.6IL-αELISA试剂盒：检测范围应达到0.18-12ng/mL。

注：以上试剂可采用相同类型的试剂进行替代

7仪器设备

7.1超净工作台：洁净度达到100级。

7.2CO细胞培养箱：37℃±1℃，5±1%CO，95%相对湿度。

22

7.3分析天平：精度0.1mg。

7.4酶标仪：检测波长范围200-999nm。

7.5-80℃超低温冰箱：用于收样培养液冻存。