兽药残留检测技术.pptVIP

1、有机溶剂沉淀甲醇、乙腈、丙酮和乙醇是沉淀蛋白常用的有机溶剂,尤以甲醇和乙腈为最常用。甲醇与蛋白形成絮状沉淀易于离心分离,得到澄清的上清液;乙腈与蛋白形成致密沉淀,易离心除去,沉淀效率较甲醇高。使用时应加入足量的沉淀剂,通常加入量为样品体积的1.5~2倍。2、酸性沉淀常用的酸性沉淀剂有三氯醋酸和高氯酸,其他还有钨酸、钼酸、磷钨酸、磷钼酸和苦味酸等。酸性沉淀剂能同蛋白质的阳离子形成不溶盐而沉淀,必要条件是溶液的pH要低于蛋白的等电点。加入沉淀剂之后立即形成白色沉淀(必要时可加热使沉淀完全),离心后可得到澄明的上清液。三氯醋酸(常用10%溶液)沉淀蛋白的作用很强,因此最常使用,但应注意试剂中含有的杂质,将它们引入离心后的上清液中,可能会干扰药物的分析。其次应注意,当上清液再用乙醚等有机溶剂萃取时,三氯醋酸则连同溶入其内的杂质会进入有机相,也可能干扰药物的分析。采用高氯酸作为蛋白沉淀剂时,其优点是残留在上清液中的ClO4-可加入钾盐除去。3、无机盐沉淀一些无机盐如硫酸铵、硫酸钠和氯化钠等,能使蛋白质胶体脱水并中和其电荷,使蛋白质失去胶体性质而沉淀下来。无机盐中以硫酸铵最常用。常用的重金属盐类有汞盐、铜盐和锌盐等,它们能与蛋白质形成不溶盐而沉淀析出。如可用HgCl2作为蛋白沉淀剂处理血浆样品,离心后用比色法测定上清液中的水杨酸浓度。采用蛋白沉淀剂,只要