褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究的开题报告.docxVIP

褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质研究的开题报告

一、研究背景及意义：

褶纹冠蚌是产贝贝类(Bivalvia)雌激素的良好模式生物，因其在海洋污染生态环境监测、生物技术利用等方面具有广泛应用前景。为探究褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因的原核表达及蛋白性质，开展本项研究，对褶纹冠蚌的分子生物学基础和应用研究将具有重要的科学意义和实用价值。

二、研究内容和目标：

1、克隆褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因(SOD)全长，并构建原核表达载体。

2、大量原核表达目的基因，以SDS和Westernblot方法鉴定表达产物，并对表达产物精制，并检测其生物学特性。

3、检测褶纹冠蚌SOD基因的表达特点及其在环境、处理等不同条件下的表达变化，探索SOD遗传转录调控机制。

三、研究方法：

1、基因克隆——采用cDNA克隆技术，使用PCR方法从褶纹冠蚌抽提的总RNA中扩增目的基因。

2、构建载体——将褶纹冠蚌SOD基因克隆入原核表达载体，如pET-28a(+),转化大肠杆菌，并进行筛选。

3、原核表达——大量培养重组菌株，采用IPTG诱导表达，获取表达产物并进行鉴定。

4、表达产物精制——采用电渗析、薄层凝胶过滤，离心等方法，对表达产物进行精制。

5、SOD功能检测——利用凝胶电泳、分光光度法、酶活性测定等手段，对精制表达产物进行生物学特性检测。

6、遗传转录调控分析——采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)技术，对褶纹冠蚌SOD基因在不同生理状况下的表达调控情况进行分析。

四、研究意义及预期结果：

通过本项研究，可以深入了解褶纹冠蚌超氧化物歧化酶基因在细胞自由基损伤自我修复过程中的生物学作用和分子机理，同时，对其在环境胁迫等条件下的生物学响应和遗传转录调控机制进行探究，有望挖掘到相关的分子检测指标和分子标记，为褶纹冠蚌的分子生物学基础研究和应用开发提供重要数据和理论支持。