原核生物的基因表达调控.pptVIP

当一个mRNA含有编码一个以上蛋白质的编码信息，而且这些蛋白质都是以独立的多肽被翻译时，这样的mRNA称之多顺反子mRNA。多顺反子mRNA在细菌中是很普遍的。多顺反子lacmRNA中的lacZ，lacY，lacA经翻译生成的产物分别为LacZ（β-半乳糖苷酶（β-galactosidase））、LacY（β-半乳糖苷通透酶（β-galactosidepermease））和LacA（β-半乳糖苷转乙酰基酶（thiogalactosidetransacetylase））。第63页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三半乳糖是lac操纵子转录的活性诱导物，人们发现一个合成的、结构上类似于别乳糖、不能被β-半乳糖苷酶水解的β-半乳糖苷异丙基硫代半乳糖苷（isopropylthiogalactoside：IPTG）起着lac操纵子的一个诱导物的作用，所以IPTG常用于诱导含有使用了lac启动子的质粒载体的细菌中的重组蛋白的表达。

第64页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三一些化学合成的乳糖类似物，不受?－半乳糖苷酶的催化分解，却也能与R特异性结合使R构象变化，诱导lac操纵子的开放。例如异丙基硫代半乳糖苷(isopropylthiog-alactoside，IPTG)就是很强的诱导剂；不被细菌代谢而十分稳定。X-gal（5-溴-4-氯-3-吲哚-β-半乳糖苷）也是一种人工化学合成的半乳糖苷，可被?－半乳糖苷酶水解产生兰色化合物，因此可以用作?－半乳糖苷酶活性的指示剂。IPTG和X-gal都被广泛应用在分子生物学和基因工程的工作中。第65页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三第66页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三第67页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三lac操纵子受LacI阻遏蛋白调控。在没有诱导剂（乳糖或IPTG）存在时，LacI阻遏蛋白与lac操纵子DNA序列结合得非常紧密，lac基因不能进行转录。当IPTG存在时，IPTG与LacI阻遏蛋白相互作用，形成LacI阻遏蛋白－IPTG复合物，体外研究表明，该复合物对lac操纵基因的亲和性为单独LacI阻遏蛋白的亲和性的千分之一。所以IPTG作为lac基因表达的一个诱导剂，起着转录去阻遏作用。就象（下图）表示的那样，RNA聚合酶的结合部位（lac操纵基因）也是LacI阻遏蛋白的结合部位，实验表明RNA聚合酶和LacI阻遏蛋白对操纵基因序列的结合是相互排斥的。

第68页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三第69页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三原核生物基因表达的调控乳糖代谢基因表达调控图解：(没有乳糖时)ＲＰＯlacZlacYlacA调节基因启动子操纵基因结构基因RNA聚合酶信使RNA转录翻译阻抑物与操纵基因结合，结构基因转录受阻．阻抑物第70页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三原核生物基因表达的调控乳糖代谢基因表达调控图解：(有乳糖时)ＲＰＯlacZlacYlacA调节基因启动子操纵基因结构基因RNA聚合酶信使RNA转录翻译阻抑物与乳糖结合后构象发生了改变，因而不能与操纵基因结合，使得结构基因进行转录。阻抑物乳糖转录半乳糖苷酶酶酶乳糖分解代谢调控过程是一个自我调控过程第71页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三2.CAP的正调控细菌中的cAMP含量与葡萄糖的分解代谢有关，当细菌利用葡萄糖分解产生能量时，cAMP生成少而分解多，cAMP含量低；相反，当环境中无葡萄糖可供利用时，cAMP含量就升高。细菌中有一种能与cAMP特异结合的cAMP受体蛋白CRP(cAMPreceptorprotein)，当CRP未与cAMP结合时它是没有活性的，当cAMP浓度升高时，CRP与cAMP结合并发生空间构象的变化而活化，称为CAP(CRP-cAMPactivatedprotein)，能以二聚体的方式与特定的DNA序列结合。第72页，讲稿共112页，2023年5月2日，星期三在lac操纵子的启动子Plac上游端有一段序列与Plac部分重叠的序列，能与CAP特异结合，称为CAP结合位点（CAPbindingsite）。CAP与这段序列结合时，可增强RNA聚合酶的转录活性，使转录提高50倍。相反，当有葡萄糖可供分解利用时，cAM