基于功能性Fe3O4纳米粒子的食源性致病菌荧光检测.pdf

摘要

食源性致病菌是引起食源性疾病爆发的主要原因。食源性致病菌的准确检测

对预防食源性疾病的爆发具有重大意义。由生物识别元件和信号转换器组成的生

物传感器可将待测物的信息转换为荧光、吸光度和电流等可检测的信号而被广泛

用于食源性致病菌的检测。其中，通过生物传感器将细菌浓度转换为荧光信号的

方法因响应速度快、灵敏度高而备受青睐。然而，现有的荧光法在检测食源性致

病菌的过程中易受到测试环境、光源强度及细菌体内蛋白质/DNA自身荧光等因

素的干扰，导致检测结果的准确度低。在本论文中，通过对FeO表面进行修饰，

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建立了基于磁性颗粒的时间分辨荧光法和荧光比色双模式分析法用于准确检测

食源性致病菌。主要工作如下：

（1）利用万古霉素（vancomycin,Van）和抗体（pIgG）在金黄色葡萄球菌

（Staphylococcusaureus,S.aureus）表面两个不同的位置与之连接形成夹心复合

物，并以四环素铕配合物（EuTc）为荧光底物发展了一种基于双位点识别策略的

时间分辨荧光法用于准确检测S.aureus。通过在磁性纳米粒子FeO表面修饰抗

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体制备了FeO-pIgG并用于从复杂样品中特异性磁捕获S.aureus。为了将识别

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S.aureus的过程转换为可检测的信号，引入纳米标记探针GOx@ZIF-90/Van。利

用表面富含醛基的金属有机框架ZIF-90的自适应包埋特性将葡萄糖氧化酶（GOx）

包埋于其中形成GOx@ZIF-90复合材料，然后将能识别S.aureus的Van通过席

夫碱反应与之偶联形成GOx@ZIF-90/Van。利用Van和pIgG在S.aureus表面两

个不同的位置与之结合形成夹心复合物。当加入EuTc和葡萄糖后，葡萄糖会被

GOx水解产生HO，HO能取代EuTc中的水分子配体从而使EuTc的荧光大

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幅增强。由于EuTc具有长荧光寿命的特点，可通过时间分辨荧光法降低背景荧

光的干扰，使检测结果更准确。这种基于双位点识别的信号放大时间分辨荧光法

能灵敏、准确地检测S.aureus。

（2）为解决荧光单信号分析模式易受测试环境影响导致检测结果准确度低

的问题，基于FeO猝灭6-羧基荧光素（FAM）的荧光和适配体（aptamers,Apts）

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增强FeO类过氧化物酶活性的特点，构建了一种荧光比色双模式生物传感器用

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于检测大肠杆菌（Escherichiacoli,E.coli）。作为一种纳米酶，FeO在酸性条件

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下具有强催化活性，可催化HO氧化3,3,5,5-四甲基联苯胺（TMB）显色，然

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而，其在中性条件下无法催化HO氧化TMB显色。6-羧基荧光素修饰的适配体

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（FAM-Apts）通过磷酸骨架与铁的相互作用吸附在FeO表面，这使得FAM的

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荧光猝灭并且增强了FeO的类酶活性。此时，FeO在中性条件下可催化HO

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