受水杨酸诱导的甜橙GSTU19基因启动子的分离和功能验证的开题报告.docxVIP

受水杨酸诱导的甜橙GSTU19基因启动子的分离和功能验证的开题报告

背景和研究意义：

水杨酸是一种植物生长素，已知在植物生长发育和逆境适应中发挥重要作用。然而，在植物响应水杨酸时，除了启动对应的信号途径外，其响应机制还存在很多未知的细节。近年来，研究表明植物GST家族蛋白在水杨酸的代谢和响应中起到重要作用，但与其互作的启动子成分和机制尚未充分研究。因此，本研究的目的是通过受水杨酸诱导的甜橙GSTU19基因启动子的分离和功能验证，深入探究水杨酸信号通路的响应机制，并为进一步阐明植物GST家族在植物响应水杨酸时的分子调节方式提供新思路和新证据。

研究内容和方法：

本研究将利用PCR扩增技术对柑桔基因组DNA进行筛选，从其中筛选出受水杨酸诱导显著的GSTU19基因的启动子序列，利用基因克隆技术将其与荧光素酶基因(LUC)构成的荧光素酶报告质粒pCAMBIA1391Z连接起来，构建植物表达载体pCAMBIA1391Z::GSTU19P-LUC并进行正确性验证；采用农杆菌介导法转化烟草叶片并激发荧光素酶活性，观测GFP的定量和定位，以及荧光素酶活性和GSTU19基因启动子序列序列的关系；最后，利用纯化技术对转录因子进行鉴定和分离，并运用EMSA实验技术进行转录因子结合启动子的鉴定。

预期结果：

本研究预期能够成功分离出受水杨酸诱导显著的甜橙GSTU19基因的启动子序列，并构建成功植物表达载体；通过激发荧光素酶活性，观测GFP的定量和定位，以及荧光素酶活性与GSTU19基因启动子序列的关系，加深对GSTU19基因启动子的功能和调节机制的认识；同时，通过鉴定和分离转录因子，并确定其与GSTU19基因启动子的结合关系，揭示其下游信号的调控机制。达到这些预期目标将有助于揭示水杨酸信号通路对植物响应逆境的调节机制。