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免疫荧光染色的质量控制

单细胞悬液荧光染色关系着流式分析的精度，应特别注意染料的特性及量效关系，由于免疫荧光染色中还涉及抗体特异性及小家问题，应严格按照实验操作的要求进行。

1温度对荧光染色的影响

环境温度的升高对荧光染色有明显的影响，可使溶液的粘滞性增加，荧光染料分子的动力增大，荧光淬灭的可能性增大，荧光分子的光子产量降低。如保持温度在20°以下，光子产量的变化不受影响。尽量减少染色样本的光照射时间，使检测时的荧光强度不受影响。

2PH对荧光发射强度的影响

不同的荧光染料对工作环境的PH要求各不相同，每一种荧光分子在溶液均以离子化状态存在，而溶液中的氢离子浓度对荧光强度影响最大。每种荧光染料的光子产量达到最大时，都与其最适PH密切相关。

3荧光染料浓度的控制

合适的荧光染料浓度是荧光定量检测的最佳信号产生的重要技术指标。在溶液浓度较稀时，荧光强度与浓度成正比关系，荧光强度随溶液中浓度加大而增强，但当达到一定浓度时，会因溶液中荧光染料分子的增加而增加相互碰撞，使荧光发生淬灭而致光子产量降低，反而使荧光强度减弱。因此，为了产生最大荧光光子产量，在染色时应选择最适浓度。

4固定剂对免疫荧光染色的影响当细胞染色后不能及时上机检测时需进行固定，固定方法应对细胞的体积大小、细胞内分子结构特性、抗体生物学特性和荧光强度无较大影响。