常用电泳技术.pptVIP

关于常用电泳技术第1页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三Contents简介及发展过程1234电泳的原理影响电泳分离的主要因素常用的电泳介绍*第2页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三1.简介及发展过程电泳可以定义为带电的胶体粒子或大分子在外加直流电场中向带相反电荷的电极做定向移动的现象。带正电荷的粒子向负极移动，带负电荷的粒子向正极移动。电泳分离则是利用荷电溶质在电场中泳动速度的差别来进行分离的一种方法。电泳技术：*第3页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三最早发现于1808年。俄国物理学家Pehce于1809年在湿黏土中插上带玻璃管的正负极两个电极，加压后发现正极玻璃管中原有的水层变浑浊，即带负电荷的黏土颗粒向正极移动，这就是电泳现象。在1937年由瑞典科学家A.tiselius利用U形玻管进行血清蛋白电泳，以界面折光率差别分离蛋白。1948年Wieland等发明以滤纸作为支持物，使电泳技术大为简化。电泳作为一种生化分离手段已广泛应用于生物大分子的分离、纯化、分析、制备以及用于测定它们的分子量、等电点等。已成为生命科学、医学、制药学、食品、生物工程、环境工程等领域常用的实验手段。*第4页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三2.电泳的原理*带有电荷生物分子在电场作用下发生移动;由于混合物各组分所带电荷性质，数量以及分子量各不同，在同一电场作用下，各组分的泳动方向和速度也各有差异;在一定时间内，他们移动距离不同，从而可达到分离鉴定的目的。第5页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三*1.蛋白质的电荷来源从电泳的角度来看，蛋白质分子最主要的特性就是它的带电行为：等电点（pI）：在某一条件的PH下，蛋白质所带的正负电荷数相等。即净电荷为零。当体系：pHpI，蛋白质分子会解离出而带负电，向阳极移动；当体系：pHpI，蛋白质分子会结合而带正电，向阴极移动；特定蛋白质的等电点取决于它的氨基酸组成，是一个物理化学常数。对于不同的蛋白质，其等电点范围很宽，在一定的PH下，不同蛋白质分子所带电荷的电性和电量不同，由此可进行蛋白质的分离和分析。pHpIpH=pIpHpI第6页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三*2.迁移率在一定的PH条件下，蛋白质分子会解离而带电，带电的性质和电荷密度取决于蛋白质分子的性质和溶液的PH。不同的带点颗粒在同一电场的运动速度不同，可以用迁移率来表示。迁移率（m，mobility）即带电颗粒在单位电场强度下的泳动速度：m迁移率，;v迁移速度，cm/s;E电场强度,V/cm;d迁移距离,cm；t电泳时间，s；U电压，V；l凝胶长度，cm。第7页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三*当球形分子在电场中以恒定速率移动时，所受的动力和阻力平衡，即：（Stoke定律）Q被分离分子所带净电荷；介质黏度；r分子半径。于是有：即：蛋白质的迁移率与带电颗粒的分子大小、介质的黏度、颗粒所带的电荷有关。一般来说，所带净电荷越多，颗粒越小，越接近球形，则在电场中迁移速率越快，反之越慢。第8页，讲稿共37页，2023年5月2日，星期三*对于两种蛋白质来讲，物质A和B：当使用同一介质分离两种物质时：物质A在电场中移动的距离:dA=mA·Et某物质B在电场中移动的距离：dB=mB·Et两物质移动距离差为：?d=(dA-dB)=(mA-mB)Et若mA=mB则?d=0两种物质不能分离若mA≠mB则?d≠0