细胞重组与细胞融合.pptVIP

细胞融合基本原理1、细胞膜表面亲水性结构—糖蛋白细胞融合的关键是要脂双层的接触，就是要去除糖蛋白，露出无糖蛋白覆盖的区域，使两个细胞的脂双层能紧密结合。第30页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三2、病毒促进细胞融合很多病毒都具有凝集细胞的能力，其原理大致如下：病毒的一边黏接在一个细胞表面，病毒的另一边黏接在另一个细胞表面，从而使两个细胞在病毒的作用下靠近发生凝结。仙台病毒促进细胞融合的有效部位在于它的膜，病毒被膜上的两种糖蛋白（HA、NA和F蛋白）可和细胞膜表面的糖蛋白发生作用，相互结合，在电镜下观察到在相接触的相邻细胞表面之间产生一些微小的细胞质桥。第31页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三3、化学诱导细胞融合（聚乙二醇PEG）PEG诱导细胞融合的两种方式：PEG含有醚键、带负电性可与细胞表面正的极性集团相连，引起细胞膜表面的蛋白起作用，使细胞相互凝集，膜蛋白质分子重排，脂类分子重排，打开质膜，细胞融合。PEG和水之间的氢键相结合，使溶液中的自由水消失，导致细胞脱水而发生膜结构的变化，使细胞相互凝集，膜蛋白质分子重排，脂类分子重排，打开质膜，细胞融合。第32页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三4、电场诱导细胞融合低压交流电场中，细胞聚集成串珠状紧密排列，相互接触的细胞膜之间会出现无蛋白颗粒的脂质区，当受到电击时，这个区域就会被击穿，产生脂双层膜孔，导致细胞之间的细胞质连通，发生细胞融合。细胞置于非常高的电场中，细胞膜就变得具有通透性，能让外界的分子扩散进细胞内，这一现象称为电穿孔。第33页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三动物细胞融合1、细胞种类和性质细胞表面性质细胞种类2、环境条件的影响温度：pH：最适为7.4-7.8氧气含量：耗氧量较大，一般大于20%3、离子强度及离子种类细胞融合时需要Ca2＋，最适为0.1mol/L细胞融合的影响因素第34页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三植物或微生物细胞融合1、PEG诱导融合的时间2、PEG纯度3、融合密度一般为2x104－8x104个/ml4、融合液中加入少量的CaCI25、其他添加组份第35页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三关于细胞重组与细胞融合第1页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三细胞重组与细胞融合细胞重组：从活细胞中分离出细胞器及其组份，在体外进行重新装配成为具有生物活性的细胞的一种技术。细胞融合：人工方法使2个或2个以上的细胞合并形成1个细胞的技术。第2页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三核体与胞质体核体：与细胞质分离后得到的带有少量细胞质并包有质膜的细胞核，也成为小型细胞。核体能够重生其胞质部分，继续生长分裂。胞质体：除去细胞核后由质膜包裹的无核细胞。细胞松弛素B处理细胞能诱发细胞排核反应，此时通过离心的方法可以将核体与胞质体分离。第3页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三微细胞微细胞：又称微核体，含有一条或几条染色体，外有一薄层细胞质和一个完整质膜的核质体。秋水仙素和长春新碱等有丝分离阻断剂能干扰微管的合成与装配，导致细胞分裂后期染色体产生发散运动，发散开的染色体各自装配出自己的核膜，形成微细胞。秋水仙胺细胞松弛素B细胞松弛素B离心第4页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三胞质体与完整细胞的重组形成胞质杂种；微细胞与完整细胞的重组形成微细胞核异体；胞质体与核体重新组合形成重组细胞。细胞重组的方式第5页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三细胞重组技术将细胞融合技术与细胞核质分离技术相结合，为重新构建不同类型的杂种细胞提供可能；细胞重组技术可以人为的将染色体或者基因进行转移，使重组细胞产生新的性状和新的特性。细胞重组的意义第6页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三细胞质工程细胞质工程：是研究真核细胞的核-质关系以及细胞器、细胞质基因转移的技术。细胞质工程是进行细胞重组的重要基础。细胞质工程涉及的技术有：1、细胞破碎2、细胞器及细胞组分分离3、细胞器转移4、胞质杂种第7页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三一、细胞破碎细胞破碎是指利用外力破坏细胞膜和细胞壁，使细胞内容物释放出来的技术。细胞破碎方法包含：1、超声波破碎法2、反复冻融法3、高速组织捣碎法4、化学裂解法5、生物酶解法第8页，讲稿共50页，2023年5月2日，星期三超声波破碎法利用超声波振荡器发射的15-25kHz的超声波探头处理细胞悬浮液，由发生器和换能器组成。反复冻融