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水中细菌菌落总数的测定DETERMINATIONOFTOTALBACTERIALCOLONIESINWATER

导语同学们，水的微生物学检验在保证饮水安全上有着重要意义，主要包括菌落总数和总大肠菌数的检验，它们是评价水质状况的重要指标。GB5749《生活饮用水卫生标准》规定1mL自来水中细菌菌落总数不得超过100个。本次课我们来学习水中菌落总数的测定方法。

一、实验目的实验目的1.掌握水中细菌菌落总数的测定方法2.了解水质评价的微生物学卫生标准，明白其应用的重要性

二、实验原理菌落总数是指1mL水样在营养琼脂培养基中于37℃培养24h后，所生长的细菌菌落总数。本实验应用平板菌落计数技术测定水中细菌菌落总数，由于水中的细菌种类繁多，因而采用营养琼脂培养基培养出的细菌总数仅是一种近似值，平板上生长的菌落数应以单位容量的菌落（ColonyFormingUnitsCFU）形成单位数报告，即CFU/mL。

三、实验器材水样：自来水、水源水。营养琼脂培养基。灭菌水样瓶、无菌水（9mL）稀释管、灭菌培养皿、灭菌移液管，普通放大镜或菌落计数器、培养箱等。

四、实验步骤1.采集自来水样先将自来水龙头灼烧3min灭菌，再放水流出5~10min后，用灭菌水样瓶接取水样。2.平板接种计数用灭菌移液管吸取1mL水样，注入灭菌培养皿，再注入15mL45℃左右营养琼脂培养基混匀，做两个平行样。另取一个空的灭菌培养皿，注入营养琼脂培养基做空白对照。培养基凝固后，倒置于恒温培养箱内于37℃下培养24h。用放大镜检查培养基表面或深处生成的菌落（像白色小点）并计数，两培养皿的平均菌落数即为1mL水样中的细菌总数。

四、实验步骤3.水源水样的稀释水源水一般含细菌较多，水样应在检验前先稀释。用灭菌吸管吸取1ml水样，注入盛有9mL无菌水的试管中摇匀，稀释度为10-1，如此类推，可连续稀释得到10-1、10-2、10-3、10-4......的一系列水样，视水样污染程度取最后的三个稀释度进行检验。本次水样采用10-1、10-2、10-33个稀释度。

四、实验步骤4.水源水样接种和计数取3个稀释度的水样各1mL，接种于培养基中放入培养箱，每个稀释度水样各做两个平行样，另做空白对照，操作方法与自来水样步骤相同。用放大镜检查计数时，注意有较大片菌苔生长时，弃用；以无片菌苔生长的平皿计数。若片菌苔大小不到培养皿的一半，其余一半分布均匀，将此一半计数乘2。记录各培养皿菌落数后，计算同一稀释度的平均菌落数。菌落总数以每个稀释度的平均菌落数乘以稀释倍数得到，应选取平均菌落数在30～300之间的培养皿进行计算。

五、报告饮用水和水样水的菌落总数1.填写检验结果2.据你的测定结果，自来水和水源水是否合乎水质标准？

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