化学合成siRNA沉默宫颈癌SiHa细胞E6基因表达的深入研究的开题报告.docxVIP

化学合成siRNA沉默宫颈癌SiHa细胞E6基因表达的深入研究的开题报告

一、选题背景

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，每年全球约有50万新病例，其中近90%的死亡发生在发展中国家。人乳头瘤病毒（HPV）是宫颈癌的主要致病因素，其中E6基因的高表达与宫颈癌的发生密切相关。小干扰RNA（siRNA）技术作为一种分子靶向治疗的新兴技术，能够选择性地切断靶基因的mRNA，从而达到基因沉默的目的。因此，将化学合成的siRNA应用于宫颈癌的基因治疗上，成为了一种研究热点。

二、研究目的及意义

本研究旨在构建化学合成的siRNA靶向宫颈癌细胞SiHa中的E6基因，探讨siRNA沉默E6基因对SiHa细胞的影响以及相关机制。通过研究，可以为宫颈癌的治疗提供新的治疗思路和方法，并深入了解siRNA技术的应用效果和机制。

三、研究方法及步骤

1.设计化学合成的siRNA靶向SiHa的E6基因。本研究将采用基于RNA的设计策略，设计优化化学合成的siRNA，并利用荧光共振能量转移（FRET）技术结合脱靶实验进行siRNA序列的筛选和优化。

2.化学合成siRNA。本研究将利用化学方法合成靶向SiHa细胞E6基因的siRNA，并进行表征和纯化。

3.转染siRNA到SiHa细胞中，分析沉默效果。采用低氧培养SiHa细胞，设计不同的siRNA浓度和处理时间，并采用qPCR和Westernblotting等方法检测细胞内E6基因表达水平变化。

4.分析沉默E6基因对SiHa细胞的影响。采用细胞增殖实验和细胞周期分析等方法，探讨沉默E6基因对SiHa细胞增殖和细胞周期的影响，从而初步探讨siRNA沉默E6基因的治疗效果。

5.深入研究siRNA沉默E6基因的机制，包括细胞凋亡、DNA损伤等影响机制的研究。

四、预期成果及创新点

1.设计和合成化学合成的siRNA靶向宫颈癌细胞SiHa中的E6基因。

2.通过siRNA沉默E6基因，初步探讨了E6基因对SiHa细胞增殖和细胞周期的影响。

3.深入研究了siRNA沉默E6基因的机制，为宫颈癌的治疗提供新的原理和方法。

4.研究结果将对临床宫颈癌治疗提供新的思路和方法。