《实验瑶山树鼩第部分遗传质量控制》.docxVIP

Q/LB.□XXXXX-XXXX

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ICS

FORMTEXT65.020.30

CCS

FORMTEXTCCS B40/49

FORMTEXT45

FORMTEXT广西壮族自治区地方标准

DBFORMTEXTXX/TFORMTEXTXXXX—FORMTEXTXXXX

FORMTEXT?????

FORMTEXT实验动物瑶山树鼩第4部分:遗传质量控制

FORMTEXTExperimentaltupaiabelangeriyaoshanensis—

Part4：Geneticqualitycontrol

FORMDROPDOWN

FORMTEXT（本草案完成时间：2022.3.27）

FORMDROPDOWN

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX发布

FORMTEXTXXXX-FORMTEXTXX-FORMTEXTXX实施

FORMTEXT广西壮族自治区市场监督管理局??发布

STYLEREF标准文件_文件编号DBXX/TXXXX—XXXX

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实验动物瑶山树鼩第4部分:遗传质量控制

范围

本文件规定了实验动物瑶山树鼩遗传分类及封闭群的遗传质量标准。

本文件适用于实验动物瑶山树鼩的遗传质量控制。

规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB14923-2010实验动物哺乳类实验动物的遗传质量控制

术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

封闭群ClosedColony

以非近亲方式进行繁殖生产的瑶山树鼩群体，在不从外部引入新的个体的条件下，至少连续繁殖4代以上，封闭群亦称远交群。

封闭群瑶山树鼩命名

封闭群的命名按照GB14923执行。

封闭群的繁殖

原则

保持封闭群树鼩的遗传异质性及基因多态性，以非近亲交配方式进行繁殖，避免近交系数随繁殖代数增加而过快上升。

引种

作为繁殖用种子的封闭群瑶山树鼩应遗传背景明确或来源清楚，有完整的资料（包括种群名称、来源、遗传基因特点及主要生物学特性等）。根据繁殖方式，在保证每代近交系数增量不大于1%的前提下，决定最小引种规模。如采用循环交配方式，引种数量不得少于13对无血缘关系（三代以内无共同祖先）的公母树鼩；若采用随机交配方式，引种数量不得少于25对无血缘关系的公母树鼩。

方法

封闭群应足够大，以保持封闭群实验动物瑶山树鼩的遗传基因的稳定，并尽量避免近亲交配。具体繁殖方法按照GB14923执行。

封闭群实验动物瑶山树鼩的遗传质量监测

检测方法

采用微卫星DNA标记检测方法。具体方法执行附录A。

抽样

按表1要求从每个封闭群中随机抽取非同窝成年树鼩，公母各半。

封闭群实验动物瑶山树鼩遗传检测抽样要求

群体大小(只)

采样数量

100

不少于15只

100

不少于30只

结果判定

群体内遗传变异采用平均杂合度指标或群体平衡状态方法进行评价。当平均杂合度在0.5～0.7时，且期望杂合度与观测杂合度经卡方检验无明显差异时，群体为合格的封闭群实验动物瑶山树鼩群体。或用群体是否达到平衡状态来判定，如果没有达到平衡状态，说明群体的基因频率或基因型频率发生变化，该封闭群实验动物瑶山树鼩群体判为不合格。具体方法执行附录A。

检测时间间隔

封闭群实验动物瑶山树鼩种群每世代至少进行一次遗传质量检测。

（规范性）

封闭群瑶山亚种树鼩微卫星DNA检测方法

实验设备

电泳仪、离心机、PCR仪、凝胶成像系统、剪刀、镊子、注射器、移液器、离心管。

试剂

DNA提取试剂盒、PCR反应试剂盒、琼脂糖凝胶回收试剂盒。

微卫星位点的选择

在附表A.2中选择16个微卫星位点。

血液基因组DNA提取

树鼩尾静脉采血0.5mL，-20℃低温保存。按血液基因组DNA提取试剂盒操作，提取基因组DNA，将符合要求的DNA置于-20℃保存备用。

PCR

PCR扩增

在PCR反应管中配制以下反应体系：(表A.1)

PCR反应体系

试剂

体积（μL）

模板DNA

1

上游引物

0.5

下游引物

0.5

dNTP(10mmol/L)

0.5

TaqBuffer

2.5

Mg2+(25mmol/L)

1

TaqDNA聚合酶（5U/μL)

0.2

ddH2O

17.8

总体积

25

扩增反应按以下程序进行：

RT-PCR退火温度的确定在其他反应成分和反应条件不变的情况下对退火温度进行优化，PCR反应程序：